Elimination of specific miRNAs by naked 14-nt sgRNAs.
Elimination of specific miRNAs by naked 14-nt sgRNAs.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0038496
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Nashimoto M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Takahashi M;Elbarbary RA;Abe M;Sato M;Yoshida T;Yamada Y;Tamura M;Nashimoto M
利用tRNase ZL的有效基因沉默（TRUE gene silencing）是一种抑制哺乳动物基因表达的新技术。TRUE基因沉默基于哺乳动物tRNase ZL的独特酶性质起作用，其可以识别靶RNA和人工小向导RNA（sgRNA）之间形成的前tRNA样或微前tRNA样复合物，并且可以在任何所需位点切割任何靶RNA。有四种类型的sgRNA，5′-half-tRNA，RNA七聚体，钩状RNA和14-nt线性RNA。在这里，我们表明针对人miR-16的14-nt线性型sgRNA可以在体外引导tRNase ZL切割miR-16，并且可以下调HEK 293细胞中的miR-16水平。我们还证明了14-nt sgRNA可以在没有任何转染试剂的情况下被活细胞有效摄取，并且可以在其中稳定存在至少24小时。裸14-nt sgRNA显著降低HEK 293和HL 60细胞中的miR-16水平。针对miR-142- 3 p、miR-206和miR-19 a/B的三种其他裸14-nt sgRNA也显示在各种哺乳动物细胞系中下调各自的miRNA水平。我们的观察结果表明，一般来说，我们可以通过使用基于真基因沉默的裸14-nt sgRNA来消除特定的细胞miRNA至少50%。
tRNase ZL-utilizing efficacious gene silencing (TRUE gene silencing) is a newly developed technology to suppress mammalian gene expression. TRUE gene silencing works on the basis of a unique enzymatic property of mammalian tRNase ZL, which is that it can recognize a pre-tRNA-like or micro-pre-tRNA-like complex formed between target RNA and artificial small guide RNA (sgRNA) and can cleave any target RNA at any desired site. There are four types of sgRNA, 5′-half-tRNA, RNA heptamer, hook RNA, and ∼14-nt linear RNA. Here we show that a 14-nt linear-type sgRNA against human miR-16 can guide tRNase ZL cleavage of miR-16 in vitro and can downregulate the miR-16 level in HEK293 cells. We also demonstrate that the 14-nt sgRNA can be efficiently taken up without any transfection reagents by living cells and can exist stably in there for at least 24 hours. The naked 14-nt sgRNA significantly reduced the miR-16 level in HEK293 and HL60 cells. Three other naked 14-nt sgRNAs against miR-142-3p, miR-206, and miR-19a/b are also shown to downregulate the respective miRNA levels in various mammalian cell lines. Our observations suggest that in general we can eliminate a specific cellular miRNA at least by ∼50% by using a naked 14-nt sgRNA on the basis of TRUE gene silencing.
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影响因子：
3.7
作者：
Elbarbary RA;Takaku H;Uchiumi N;Tamiya H;Abe M;Takahashi M;Nishida H;Nashimoto M
通讯作者：
Nashimoto M
影响因子：
14.9
作者：
Nashimoto, M
通讯作者：
Nashimoto, M
DOI：
10.1073/pnas.0806202105
发表时间：
2008-09-02
影响因子：
11.1
作者：
Pichiorri, Flavia;Suh, Sung-Suk;Croce, Carlo M.
通讯作者：
Croce, Carlo M.
影响因子：
14.9
作者：
Nashimoto, M;Geary, S;Kaspar, R
通讯作者：
Kaspar, R
影响因子：
3.8
作者：
GRAHAM, FL;SMILEY, J;NAIRN, R
通讯作者：
NAIRN, R