Simplified equation to extract diffusion coefficients from confocal FRAP data.
Simplified equation to extract diffusion coefficients from confocal FRAP data.
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DOI：
10.1111/tra.12008
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发表时间：
2012-12
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
DiBenedetto E
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kang M;Day CA;Kenworthy AK;DiBenedetto E
扩散的定量测量可以提供关于蛋白质和脂质如何与细胞内的环境相互作用以及扩散物质的有效大小的重要信息。共聚焦FRAP是测量活细胞中蛋白质和脂质扩散的最广泛使用的方法之一。然而，目前缺乏直接的方法来量化共焦FRAP测量的绝对扩散系数。在这里，我们报告了一个简化的方程，可用于提取扩散系数从共聚焦FRAP数据使用的半恢复时间和有效的漂白半径的圆形漂白区域，并验证此方程的一系列荧光标记的可溶性和膜结合的蛋白质和脂质。我们表明，使用这种方法，扩散系数范围超过三个数量级，可以从标准成像条件下进行的共聚焦FRAP测量，突出其广泛的适用性。
Quantitative measurements of diffusion can provide important information about how proteins and lipids interact with their environment within the cell and the effective size of the diffusing species. Confocal FRAP is one of the most widely accessible approaches to measure protein and lipid diffusion in living cells. However, straightforward approaches to quantify confocal FRAP measurements in terms of absolute diffusion coefficients are currently lacking. Here, we report a simplified equation that can be used to extract diffusion coefficients from confocal FRAP data using the half time of recovery and effective bleach radius for a circular bleach region, and validate this equation for a series of fluorescently labeled soluble and membrane-bound proteins and lipids. We show that using this approach, diffusion coefficients ranging over three orders of magnitude can be obtained from confocal FRAP measurements performed under standard imaging conditions, highlighting its broad applicability.
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