Sequence-specific resonance assignments of the 1H-NMR spectra and structural characterization in solution of the HIV-1 transframe protein p6.
Sequence-specific resonance assignments of the 1H-NMR spectra and structural characterization in solution of the HIV-1 transframe protein p6.
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HIV-1 转架蛋白 p6 溶液中 1H-NMR 谱的序列特异性共振分配和结构表征。
DOI：
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发表时间：
1996
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
R. Wagner
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
M. Beissinger;C. Paulus;P. Bayer;H. Wolf;P. Rösch;R. Wagner
人类免疫缺陷病毒 1 型 (HIV-1) pol 阅读框中蛋白酶上游直接编码的移码蛋白 p6* 被认为是蛋白酶激活的天然抑制剂，并在 Gag 和 Gag-Pol 前体的多蛋白加工中发挥作用。为了对 p6* 转架蛋白进行结构表征，将 p6* 编码区克隆到载体 pGEX-KG 中，并在 tac 启动子控制下作为与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 的融合蛋白在大肠杆菌中表达。构建体的凝血酶切割产生 70 个氨基酸的多肽，与天然 p6* 序列相比，该多肽在 N 末端延伸了两个额外的残基。天然纯化程序包括亲和层析和尺寸排阻层析步骤，产生了足够量的适合 NMR 光谱的高纯蛋白质。应用荧光、圆二色性和 1H-NMR 光谱来表征蛋白质的结构。二维 NMR 谱提供了 pH 5.9 时基本完整的序列特异性共振归属。尽管有证据表明该蛋白质的 N 末端存在螺旋形成趋势，但实验表明 p6* 没有整体稳定的二级或三级结构，单个色氨酸暴露在水溶液中。然而，本文报道的结果为在体外结构和功能研究中进一步表征 p6* 与 HIV-1 蛋白酶的相互作用开辟了道路。
The frameshift protein p6* encoded directly upstream of the protease in the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) pol reading frame is thought to be a natural inhibitor of protease activation and to play a role in the polyprotein processing of Gag and Gag-Pol precursors. To allow structural characterization of the p6* transframe protein, the p6* coding region was cloned into the vector pGEX-KG and expressed in Escherichia coli as a fusion protein with glutathione S-transferase (GST) under the control of the tac promoter. Thrombin cleavage of the construct resulted in a 70-amino-acid polypeptide which is extended by two additional residues at the N-terminus compared to the natural p6* sequence. The native purification procedure including an affinity and a size-exclusion chromatography step yielded sufficient amounts of highly pure protein suitable for NMR spectroscopy. Fluorescence, circular dichroism and 1H-NMR spectroscopy were applied to characterize the structure of protein. Two-dimensional NMR spectra provided essentially complete sequence-specific resonance assignments at pH 5.9. Although there is evidence for a helix-forming tendency in the N-terminus of the protein, the experiments indicate that p6* has no overall stable secondary or tertiary structure with the single tryptophan exposed in aqueous solution. However, the results reported herein open the way to characterize further the interaction of p6* with the HIV-1 protease in structural and functional in vitro studies.
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DOI：
10.1073/pnas.86.15.5781
发表时间：
1989-08-01
影响因子：
11.1
作者：
GOTTLINGER, HG;SODROSKI, JG;HASELTINE, WA
通讯作者：
HASELTINE, WA
影响因子：
2.9
作者：
GUAN, KL;DIXON, JE
通讯作者：
DIXON, JE
影响因子：
5.6
作者：
KNELLER, DG;COHEN, FE;LANGRIDGE, R
通讯作者：
LANGRIDGE, R
影响因子：
2.9
作者：
SREERAMA, N;WOODY, RW
通讯作者：
WOODY, RW
DOI：
10.1073/pnas.88.8.3195
发表时间：
1991-04-01
影响因子：
11.1
作者：
GOTTLINGER, HG;DORFMAN, T;HASELTINE, WA
通讯作者：
HASELTINE, WA