In vitro reconstitution of a highly processive recombinant human dynein complex.
In vitro reconstitution of a highly processive recombinant human dynein complex.
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DOI：
10.15252/embj.201488792
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发表时间：
2014-09-01
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Carter AP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schlager MA;Hoang HT;Urnavicius L;Bullock SL;Carter AP
细胞质动力蛋白是一种分子量约为1.4MDa的多蛋白质复合物，可将许多细胞内的物质转运到微管的负端。几项对哺乳动物动力蛋白的体外研究表明，单个马达并不具有强大的进行性，这就提出了动力蛋白相关货物如何在细胞中长距离移动的问题。在这里，我们报告的生产完全重组人类动力蛋白复合物从一个单一的杆状病毒在昆虫细胞。单个复合物很少在体外显示定向运动。然而，将动力蛋白与货物衔接子BICD 2（BICD 2N）的N-末端区域一起添加，引起单向动力蛋白在非常长的距离上的运动。单分子荧光显微镜提供的证据表明，BICD 2N和dynactin刺激的持续合成能力，通过调节个别动力蛋白复合物，而不是通过促进寡聚化的电机复合物。负染色电子显微镜显示动力蛋白-动力肌动蛋白-BICD 2N复合物是有序的，动力肌动蛋白大约沿着动力蛋白尾部的长度定位。总的来说，我们的研究结果提供了一个新的机制，协调货物绑定与长距离运动的洞察力。
Cytoplasmic dynein is an approximately 1.4 MDa multi-protein complex that transports many cellular cargoes towards the minus ends of microtubules. Several in vitro studies of mammalian dynein have suggested that individual motors are not robustly processive, raising questions about how dynein-associated cargoes can move over long distances in cells. Here, we report the production of a fully recombinant human dynein complex from a single baculovirus in insect cells. Individual complexes very rarely show directional movement in vitro. However, addition of dynactin together with the N-terminal region of the cargo adaptor BICD2 (BICD2N) gives rise to unidirectional dynein movement over remarkably long distances. Single-molecule fluorescence microscopy provides evidence that BICD2N and dynactin stimulate processivity by regulating individual dynein complexes, rather than by promoting oligomerisation of the motor complex. Negative stain electron microscopy reveals the dynein–dynactin–BICD2N complex to be well ordered, with dynactin positioned approximately along the length of the dynein tail. Collectively, our results provide insight into a novel mechanism for coordinating cargo binding with long-distance motor movement.
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影响因子：
3.7
作者：
Larsen KS;Xu J;Cermelli S;Shu Z;Gross SP
通讯作者：
Gross SP
影响因子：
56.9
作者：
Kural, C;Kim, H;Selvin, PR
通讯作者：
Selvin, PR
DOI：
10.1073/pnas.1215462109
发表时间：
2012-11-06
影响因子：
11.1
作者：
Hendricks, Adam G.;Holzbaur, Erika L. F.;Goldman, Yale E.
通讯作者：
Goldman, Yale E.
影响因子：
3.5
作者：
Engelender, S;Sharp, AH;Ross, CA
通讯作者：
Ross, CA
影响因子：
3.9
作者：
Dienstbier, Martin;Li, Xuan
通讯作者：
Li, Xuan