Quantification of PtdInsP3 molecular species in cells and tissues by mass spectrometry.
Quantification of PtdInsP3 molecular species in cells and tissues by mass spectrometry.
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DOI：
10.1038/nmeth.1564
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发表时间：
2011-03
期刊：
影响因子：
48
通讯作者：
Hawkins, Phillip T.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Clark, Jonathan;Anderson, Karen E.;Juvin, Veronique;Smith, Trevor S.;Karpe, Fredrik;Wakelam, Michael J. O.;Stephens, Len R.;Hawkins, Phillip T.
I类磷酸肌醇-3-激酶（PI 3 K）亚型产生细胞内信号传导脂质，磷脂酰肌醇（3，4，5）三磷酸（PtdIns（3，4，5）P3）。PtdIns（3，4，5）P3调节细胞行为的主要方面，遗传和药理学干预的使用揭示了PI 3 Ks在健康和疾病中的重要亚型特异性作用。尽管有这种兴趣，目前用于测量PtdIns（3，4，5）P3的方法具有主要局限性，包括不灵敏度、依赖放射性标记、低通量和不能分辨不同的脂肪酰基物质。我们介绍了一种基于磷酸甲基化结合高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）的方法来解决这些问题，并描述了一种综合方法来定量PtdIns（3，4，5）P3和相关的磷酸肌醇（PtdInsP和PtdInsP 2的区域异构体未解决）。该方法可以定量未刺激的鼠和人细胞（≥ 105）或组织（≥ 0.1 mg）中PtdIns（3，4，5）P3的多种脂肪酰基物质及其在适当刺激后的增加。
Class I phosphoinositide-3-kinase (PI3K) isoforms generate the intracellular signalling lipid, phosphatidylinositol(3,4,5)trisphosphate (PtdIns(3,4,5)P3). PtdIns(3,4,5)P3 regulates major aspects of cellular behavior and the use of both genetic and pharmacological intervention has revealed important isoform-specific roles for PI3Ks in health and disease. Despite this interest, current methods for measuring PtdIns(3,4,5)P3 have major limitations, including insensitivity, reliance on radiolabeling, low throughput and an inability to resolve different fatty-acyl species. We introduce a methodology based upon phosphate methylation coupled to high performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS) to solve many of these problems and describe an integrated approach to quantify PtdIns(3,4,5)P3 and related phosphoinositides (regio-isomers of PtdInsP and PtdInsP2 are not resolved). This methodology can quantify multiple fatty-acyl species of PtdIns(3,4,5)P3 in un-stimulated murine and human cells (≥ 105) or tissues (≥ 0.1 mg) and their increase upon appropriate stimulation.
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通讯作者：
Garraway LA
影响因子：
6.5
作者：
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通讯作者：
Wakelam, Michael J. O.
影响因子：
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作者：
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通讯作者：
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作者：
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通讯作者：
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DOI：
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发表时间：
1999-04-21
期刊：
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影响因子：
--
作者：
Painter, GF;Grove, SJA;Stephens, LR
通讯作者：
Stephens, LR