Generation of gene disruptions by transcription activator-like effector nucleases (TALENs) in Xenopus tropicalis embryos.
Generation of gene disruptions by transcription activator-like effector nucleases (TALENs) in Xenopus tropicalis embryos.
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DOI：
10.1186/2045-3701-3-21
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发表时间：
2013-05-10
影响因子：
7.5
通讯作者：
Zhao H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lei Y;Guo X;Deng Y;Chen Y;Zhao H
类转录激活因子效应核酸酶 (TALEN) 是新型工程 DNA 核酸酶，已被证明可有效用于多种物种的基因特异性靶向。最近，我们报道了利用 TALEN 对非洲爪蟾胚胎进行基因破坏。在这里，我们总结了我们基因破坏研究中使用的方案。该协议涵盖 TALEN 靶向位点的选择、使用修改后的金门方法进行 TALEN 组装以及将 TALEN mRNA 注射到热带爪蟾胚胎中。我们还提供检测体细胞和种系传播突变的详细信息。最后，我们简要描述了淘汰爪蟾系的建立。该协议将促进 TALEN 在非洲爪蟾生物学研究中的更广泛应用。
Transcription activator-like effector nucleases (TALENs) are novel engineered DNA nucleases, and have been proven to be effective for gene specific targeting in various species. Recently we reported gene disruptions in Xenopus embryos by using TALENs. Here we summarize the protocol that is used in our studies for gene disruption. This protocol covers selection of TALEN targeting sites, TALEN assembly with a modified Golden Gate method, and injection of TALEN mRNAs into Xenopus tropicalis embryos. We also provide details for detection of somatic and germ line transmitted mutations. And finally, we briefly describe establishment of knockout Xenopus lines. This protocol will facilitate broader applications of TALENs in studies of Xenopus biology.
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