An attempt to detect siRNA-mediated genomic DNA modification by artificially induced mismatch siRNA in Arabidopsis.
An attempt to detect siRNA-mediated genomic DNA modification by artificially induced mismatch siRNA in Arabidopsis.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0081326
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Mishiba K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Miyagawa Y;Ogawa J;Iwata Y;Koizumi N;Mishiba K
尽管近年来在高等植物中小干扰RNA （siRNA）功能的分子机制研究取得了巨大进展，但基因组DNA与siRNA直接相互作用的可能性仍然是一个谜。这种相互作用在“RNA缓存”假说中被提出，其中基于模板导向的基因转换恢复突变等位基因。为了验证这一假设，我们在地塞米松（DEX）存在的情况下，培养了转基因拟南芥植物，有条件地表达突变的乙酰乳酸合成酶（mALS）基因编码序列的发夹dsRNA构建物，该基因编码序列赋予氯磺隆抗性。在转基因植株中，经DEX处理后，内源ALS mRNA表达和21-nt mALS siRNA表达均受到抑制。经筛选10万株mALS sirna诱导植株，未获得抗氯磺隆的植株。进一步的转基因愈伤组织实验也表明，dex诱导的mALS siRNA表达不影响抗氯磺隆愈伤组织的数量。在dex处理的愈伤组织中，未观察到与dsRNA区域对应的基因组ALS区域的胞嘧啶甲基化痕迹。这些结果并不一定反驳“RNA缓存”假说，但表明抑制ALS mRNA的RNAi机制不会改变ALS基因座，无论是遗传上还是表观遗传上。
Although tremendous progress has been made in recent years in identifying molecular mechanisms of small interfering RNA (siRNA) functions in higher plants, the possibility of direct interaction between genomic DNA and siRNA remains an enigma. Such an interaction was proposed in the ‘RNA cache’ hypothesis, in which a mutant allele is restored based on template-directed gene conversion. To test this hypothesis, we generated transgenic Arabidopsis thaliana plants conditionally expressing a hairpin dsRNA construct of a mutated acetolactate synthase (mALS) gene coding sequence, which confers chlorsulfuron resistance, in the presence of dexamethasone (DEX). In the transgenic plants, suppression of the endogenous ALS mRNA expression as well as 21-nt mALS siRNA expression was detected after DEX treatment. After screening >100,000 progeny of the mALS siRNA-induced plants, no chlorsulfuron-resistant progeny were obtained. Further experiments using transgenic calli also showed that DEX-induced expression of mALS siRNA did not affect the number of chlorsulfuron-resistant calli. No trace of cytosine methylation of the genomic ALS region corresponding to the dsRNA region was observed in the DEX-treated calli. These results do not necessarily disprove the ‘RNA cache’ hypothesis, but indicate that an RNAi machinery for ALS mRNA suppression does not alter the ALS locus, either genetically or epigenetically.
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影响因子：
4
作者：
Mathieu, O;Bender, J
通讯作者：
Bender, J
DOI：
10.1073/pnas.96.15.8774
发表时间：
1999-07-20
影响因子：
11.1
作者：
Beetham, PR;Kipp, PB;May, GD
通讯作者：
May, GD
影响因子：
56.9
作者：
CHALEFF, RS;MAUVAIS, CJ
通讯作者：
MAUVAIS, CJ
影响因子：
7.2
作者：
Clough, SJ;Bent, AF
通讯作者：
Bent, AF
DOI：
10.1007/bf00331020
发表时间：
1986-01-01
期刊：
MOLECULAR AND GENERAL GENETICS
影响因子：
--
作者：
HAUGHN, GW;SOMERVILLE, C
通讯作者：
SOMERVILLE, C