Adenovirus mediated expression "in vivo" of the chemokine receptor CXCR1.
Adenovirus mediated expression "in vivo" of the chemokine receptor CXCR1.
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腺病毒介导趋化因子受体CXCR1的“体内”表达。
DOI：
10.1007/s10969-008-9051-x
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发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Navarro,J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sarmiento,J;Kypreos,KE;Prado,GN;Suetomi,K;Stanzel,C;Maxwell,C;Shumate,D;Tandang-Silvas,MR;Rajarathnam,K;Navarro,J
膜蛋白结构分析中的一个主要障碍是表达功能性和同质形式的蛋白质。除视紫红质外，大多数G蛋白偶联受体（GPCR）的内源性表达水平非常低。GPCR在细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞系中的异源表达通常产生具有大量错误折叠蛋白和异源翻译后修饰的蛋白质。在这里，我们报告了一种新的哺乳动物“体内”系统的趋化因子受体CXCR 1的表达。该受体在用编码CXCR 1的腺病毒感染的小鼠的肝脏中表达。感染小鼠的肝细胞膜显示高水平的125 I标记的人白细胞介素-8（IL-8）结合。“体内”表达的重组CXCR 1的药理学特征与中性粒细胞中表达的相似。我们发现，在Gi/Go蛋白存在的情况下，将去污剂溶解的CXCR 1掺入磷脂囊泡中是重建125 I-IL-8结合所必需的。在CXCR 1中存在几个内源性His残基和糖基化部分的基础上，我们通过采用Ni-和伴刀豆球蛋白A-色谱法对洗涤剂溶解的质膜进行了分级。通过与受体结合的125 I-IL-8和抗CXCR 1抗体的蛋白质印迹来监测富含CXCR 1的部分。该表达系统可用于GPCR和其他真核细胞膜蛋白的表达。
A major hurdle in the structural analysis of membrane proteins is the expression of a functional and homogeneous form of the protein. Except for rhodopsin, most G protein-coupled receptors (GPCRs) are endogenously expressed at very low levels. Heterologous expression of GPCRs in bacteria, yeast, insect cells or mammalian cell lines often yields proteins with large amounts of misfolded proteins and heterogeneous posttranslational modifications. Here, we report a novel mammalian “in vivo” system for the expression of the chemokine receptor CXCR1. This receptor was expressed in liver of mice infected with adenovirus encoding CXCR1. Liver plasma membranes from infected mice displayed high-levels of125I-labeled human interleukin-8 (IL-8) binding. The pharmacological profile of the recombinant CXCR1 expressed “in vivo” was similar to those expressed in neutrophils. We found that the incorporation of the detergent solubilized CXCR1 into phospholipid vesicles in the presence of Gi/Go proteins is required for the reconstitution of125I-IL-8 binding. On the basis of the presence of the several endogenous His residues and glycosylation moieties in CXCR1 we fractionated the detergent-solubilized plasma membranes by employing Ni- and Concanavalin A-based chromatography. Fractions enriched with CXCR1 were monitored by125I-IL-8-bound to the receptor and Western blots with anti-CXCR1 antibodies. This robust expression system could be readily applied for the expression of GPCRs and other eukaryotic membrane proteins.
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