Reverse genetics plasmid for cloning unstable influenza A virus gene segments.
Reverse genetics plasmid for cloning unstable influenza A virus gene segments.
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DOI：
10.1016/j.jviromet.2011.01.021
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发表时间：
2011-05
影响因子：
3.1
通讯作者：
Wentworth, David E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou, Bin;Jerzak, Greta;Scholes, Derek T.;Donnelly, Matthew E.;Li, Yan;Wentworth, David E.
关键词：
反向遗传学方法能够完全从质粒产生重组甲型流感病毒，对于研究病毒复制、形态发生、发病机制或传播非常重要。此外，流感病毒反向遗传学现在对于开发针对这种人类和动物病原体的新疫苗至关重要。流感病毒的基因片段在细菌的质粒中周期性地不稳定。高致病性禽H5流感病毒A/Turkey/安大略/7732/1966（Ty/Ont）的PB 2基因片段在通常可获得的克隆质粒（例如，pcDNA3.1/V5-His-TOPO）和标准流感病毒反向遗传学质粒（例如，pHH 21），其含有高拷贝复制起点。因此，开发了低拷贝流感反向遗传学质粒（pGJ 3C 3），以使得能够使用基于连接非依赖性重组的克隆来快速克隆不稳定的甲型流感病毒基因。利用pGJ 3C 3质粒有效地克隆了不稳定的Ty/Ont PB 2基因片段，并将该克隆用于拯救重组Ty/Ont病毒。这种低拷贝反向遗传质粒将用于克隆甲型流感病毒的其他不稳定片段，以拯救重组病毒，这将促进基础研究和疫苗种子库生产。
Reverse genetics approaches that enable the generation of recombinant influenza A viruses entirely from plasmids are invaluable for studies on virus replication, morphogenesis, pathogenesis, or transmission. Furthermore, influenza virus reverse genetics is now critical for the development of new vaccines for this human and animal pathogen. Periodically, influenza gene segments are unstable within plasmids in bacteria. The PB2 gene segment of a highly pathogenic avian H5 influenza virus A/Turkey/Ontario/7732/1966 (Ty/Ont) was unstable in commonly available cloning plasmids (e.g., pcDNA3.1/V5-His-TOPO) and in standard influenza virus reverse genetics plasmids (e.g., pHH21), which contain high copy origins of replication. Thus, a low-copy influenza reverse genetics plasmid (pGJ3C3) was developed to enable rapid cloning of unstable influenza A virus genes using ligation-independent recombination-based cloning. The unstable Ty/Ont PB2 gene segment was efficiently cloned using the pGJ3C3 plasmid and this clone was used to rescue a recombinant Ty/Ont virus. This low copy reverse genetics plasmid will be useful for cloning other unstable segments of influenza A viruses in order to rescue recombinant viruses, which will facilitate basic studies and vaccine seed stock production.
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DOI：
10.1007/bf00430440
发表时间：
1986-01-01
期刊：
MOLECULAR AND GENERAL GENETICS
影响因子：
--
作者：
LOPILATO, J;BORTNER, S;BECKWITH, J
通讯作者：
BECKWITH, J
影响因子：
5.5
作者：
Zhou, Bin;Li, Yan;Belser, Jessica A.;Pearce, Melissa B.;Schmolke, Mirco;Subba, Anju X.;Shi, Zhengli;Zaki, Sherif R.;Blau, Dianna M.;Garcia-Sastre, Adolfo;Tumpey, Terrence M.;Wentworth, David E.
通讯作者：
Wentworth, David E.
DOI：
10.1073/pnas.96.16.9345
发表时间：
1999-08-03
影响因子：
11.1
作者：
Neumann, G;Watanabe, T;Kawaoka, Y
通讯作者：
Kawaoka, Y
影响因子：
5.4
作者：
Zhou, Bin;Li, Yan;Wentworth, David E.
通讯作者：
Wentworth, David E.
影响因子：
5.4
作者：
Fodor, E;Devenish, L;García-Sastre, A
通讯作者：
García-Sastre, A