Filter trapping protocol to detect aggregated proteins in human cell lines.
Filter trapping protocol to detect aggregated proteins in human cell lines.
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DOI：
10.1016/j.xpro.2022.101571
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发表时间：
2022-09-16
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Iwasaki, Shintaro
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chhipi-Shrestha, Jagat K.;Yoshida, Minoru;Iwasaki, Shintaro
蛋白质稳态的丧失导致细胞毒性蛋白质聚集体，这是衰老和神经系统疾病的共同标志。在这里，我们提出了一个调整后的过滤捕获检测协议，以检测全球聚集的蛋白在人类细胞系，通过高灵敏度的蛋白质染色方法。该方案还详细说明了一种替代方法，通过随后对异位表达的和内源性蛋白质进行免疫印迹，来监测截留在滤膜中的特定蛋白质聚集体。有关本方案使用和执行的完整详细信息，请参阅。在醋酸纤维素膜上捕获抗SDS蛋白聚集体高灵敏度滤膜上的总蛋白染色免疫探测滤膜上的特异性聚集蛋白出版商说明：进行任何实验方案都需要遵守当地机构的实验室安全和道德准则。蛋白质稳态的丧失导致细胞毒性蛋白质聚集体，这是衰老和神经系统疾病的共同标志。在这里，我们提出了一个调整后的过滤捕获检测协议，以检测全球聚集的蛋白在人类细胞系，通过高灵敏度的蛋白质染色方法。该方案还详细说明了一种替代方法，通过随后对异位表达的和内源性蛋白质进行免疫印迹，来监测截留在滤膜中的特定蛋白质聚集体。
The loss of protein homeostasis results in cytotoxic protein aggregates, a common hallmark of aging and neurological diseases. Here, we present an adjusted filter-trapping assay protocol to detect global aggregated proteins in human cell lines, via a high-sensitive protein staining method. This protocol also details an alternative approach to monitor specific protein aggregates trapped in the filter membrane, by subsequent immunoblotting of ectopically expressed and endogenous proteins. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to. Trapping SDS-resistant protein aggregates on a cellulose acetate membrane Total protein staining on the filter membrane with high sensitivity Immunoprobing specific aggregated proteins on the filter membrane Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. The loss of protein homeostasis results in cytotoxic protein aggregates, a common hallmark of aging and neurological diseases. Here, we present an adjusted filter-trapping assay protocol to detect global aggregated proteins in human cell lines, via a high-sensitive protein staining method. This protocol also details an alternative approach to monitor specific protein aggregates trapped in the filter membrane, by subsequent immunoblotting of ectopically expressed and endogenous proteins.
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