Electrophilic probes for deciphering substrate recognition by O-GlcNAc transferase.
Electrophilic probes for deciphering substrate recognition by O-GlcNAc transferase.
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DOI：
10.1038/nchembio.2494
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发表时间：
2017-12
影响因子：
14.8
通讯作者：
Jiang J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hu CW;Worth M;Fan D;Li B;Li H;Lu L;Zhong X;Lin Z;Wei L;Ge Y;Li L;Jiang J
O-linked β- n -乙酰氨基葡萄糖（O-GlcNAc）转移酶（OGT）是一种必需的人类糖基转移酶，可以在许多蛋白质上添加O-GlcNAc修饰。然而，人们对OGT如何识别各种蛋白质底物知之甚少。在这里，我们报告了GlcNAc亲电探针（GEPs），以加快表征ogt底物识别。来自质谱、x射线结晶、生化和放射性标记动力学分析的数据支持GEPs的应用，以快速报告OGT突变对蛋白质底物或糖结合的影响，并发现对蛋白质识别至关重要的OGT残基。有趣的是，我们发现n端结构域内表面的相同残基有助于OGT与不同蛋白质底物的相互作用。通过调整反应条件，GEP使OGT与受体底物原位交联，提供了一种独特的方法来发现与OGT弱或瞬态相互作用的真正底物。因此，gep提供了分析ogt底物结合和识别的新策略。
O-linked β-N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) transferase (OGT) is an essential human glycosyltransferase that adds O-GlcNAc modifications on numerous proteins. However, little is known about how OGT recognizes various protein substrates. Here we report GlcNAc electrophilic probes (GEPs) to expedite the characterization of OGT-substrate recognition. Data from mass spectrometry, X-ray crystallization, and biochemical and radiolabeled kinetic assays support the application of GEPs to rapidly report the impacts of OGT mutations on protein substrate or sugar binding and to discover OGT residues crucial for protein recognition. Interestingly, we found that the same residues on the inner surface of the N-terminal domain contribute to OGT interactions with different protein substrates. By tuning reaction conditions, a GEP enables crosslinking of OGT with acceptor substrates in situ, affording a unique method to discover genuine substrates that weakly or transiently interact with OGT. Hence, GEPs provide new strategies to dissect OGT-substrate binding and recognition.
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影响因子：
4.8
作者：
Kreppel, LK;Hart, GW
通讯作者：
Hart, GW
DOI：
10.1107/s0907444904019158
发表时间：
2004-12-01
影响因子：
2.2
作者：
Emsley, P;Cowtan, K
通讯作者：
Cowtan, K
DOI：
10.1126/science.1243990
发表时间：
2013-12-06
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Lazarus MB;Jiang J;Kapuria V;Bhuiyan T;Janetzko J;Zandberg WF;Vocadlo DJ;Herr W;Walker S
通讯作者：
Walker S
影响因子：
4.3
作者：
Lazarus, BD;Love, DC;Hanover, JA
通讯作者：
Hanover, JA
影响因子：
16.6
作者：
Hart GW;Slawson C;Ramirez-Correa G;Lagerlof O
通讯作者：
Lagerlof O