Structure and subunit dissociation of the mouse glucocorticoid receptor: rapid analysis using vertical tube rotor sucrose gradients.
Structure and subunit dissociation of the mouse glucocorticoid receptor: rapid analysis using vertical tube rotor sucrose gradients.
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小鼠糖皮质激素受体的结构和亚基解离：使用垂直管转子蔗糖梯度快速分析。
DOI：
10.1016/0003-9861(84)90108-5
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发表时间：
1984
影响因子：
3.9
通讯作者：
W. Vedeckis
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
S. B. Eastman‐Reks;C. E. Reker;W. Vedeckis
采用Beckman VTi 80垂直管转子在蔗糖梯度上分析了小鼠AtT-20垂体瘤细胞系糖皮质激素受体的结构和亚基解离。这种技术提供了一个非常快速的分析（65分钟）的各种沉淀形式相比，摆桶转子蔗糖梯度，需要16小时运行。因此，有可能在0.3MKCl存在下检测和研究双甘氨酯稳定的、寡聚的、未转化的受体（9.1 S）。在类似条件下，使用摆斗转子，只有单体，转化的物种（3.8 S）被观察到。也就是说，使用垂直管转子使人为亚基解离最小化，从而允许在更天然的状态下研究受体结构。进一步的研究表明，Sephadex LH-20层析引起受体转化。因此，在某些情况下，葡聚糖-活性炭吸附对于去除未结合的激素是优选的。最后，使用垂直管转子蔗糖梯度，确定小鼠AtT-20糖皮质激素受体的转化涉及将低聚物9.1 S未转化的种类转化为5.2 S转化的部分。这表明，5.2 S，中间转化的物种可能是生理相关的形式，这种基因调控蛋白。
The structure and subunit dissociation of the glucocorticoid receptor from the mouse AtT-20 pituitary tumor cell line was analyzed on sucrose gradients using a Beckman VTi 80 vertical tube rotor. This technique afforded a very rapid analysis (65 min) of the variously sedimenting forms compared to swinging-bucket rotor sucrose gradients, which take 16 h to run. Thus, it was possible to detect and study the molybdate-stabilized, oligomeric, untransformed receptor (9.1 S) in the presence of 0.3MKCl. Under similar conditions using the swinging-bucket rotor, only the monomeric, transformed species (3.8 S) was observed. That is, artifactual subunit dissociation was minimized using the vertical tube rotor, allowing the study of the receptor structure in a more native state. Further studies demonstrated that Sephadex LH-20 chromatography causes receptor transformation. Thus, dextran-charcoal adsorption is preferred for the removal of unbound hormone under certain circumstances. Finally, using vertical tube rotor sucrose gradients, it was determined that the transformation of the mouse AtT-20 glucocorticoid receptor involves a conversion of the oligomeric, 9.1 S, untransformed species to a 5.2 S, transformed moiety. This suggests that the 5.2 S, intermediate transformed species may be the physiologically relevant form of this gene regulatory protein.
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