Molecular characterization of hepatitis E virus ORF1 gene supports a papain-like cysteine protease (PCP)-domain activity.
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DOI：
10.1016/j.virusres.2013.07.020
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发表时间：
2013-12-26
期刊：
影响因子：
5
通讯作者：
Parvez MK
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Parvez MK
戊型肝炎病毒（HEV）ORF 1编码非结构多蛋白，其中PCP结构域在ORF 1蛋白水解和/或RNA复制中的作用仍然存在争议。构建了一系列HEV-SAR 55复制子的ORF 1突变体，并在S10-3细胞中测试了活力。PCP的6个半胱氨酸突变体（C457 A、C459 A、C471 A、C472 A、C481 A和C483 A）和3个组氨酸突变体（H443 L、H497 L和H590 L）具有致死性。此外，在风疹病毒蛋白酶底物（G1299-G1300-G1301）的下游X结构域中鉴定出高度保守的“甘氨酸三联体”（G815-G816-G817），其中两个X突变体（G816 V和G817 V）变成致死性的。然而，所有的ORF 1序列核苷酸突变体的氨基酸保存是可行的，这清楚地表明PCP和X-结构域的翻译后调节HEV复制。此外，虽然载体表达的ORF 1融合多聚蛋白在体外产生了约191 kDa的条带，但在体外产生了约78和约35 kDa的片段。总的来说，“PCP-催化”和“X-底物”残基对HEV复制的不可或缺性和功能效应强烈支持病毒蛋白酶。
Hepatitis E Virus (HEV) ORF1 encodes the nonstructural polyprotein wherein a role of PCP-domain in ORF1 proteolysis and/or RNA replication still remains contested. A series of ORF1 mutants of HEV-SAR55 replicon were constructed and tested for viability in S10-3 cells. Six of PCP-‘cysteine’ (C457A, C459A, C471A, C472A, C481A and C483A) and three ‘histidine’ (H443L, H497L and H590L) mutants were lethal. Further, a highly conserved ‘glycine-triad’ (G815-G816-G817) in downstream X-domain, homologous to rubella virus protease-substrate (G1299-G1300-G1301) was identified where two of X-mutants (G816V and G817V) turned lethal. However, all ORF1 sequential nucleotide-mutants conserving the amino acids were viable, which clearly showed post-translational regulation of HEV replication by PCP- and X-domains. Moreover, while vector-expressed ORF1-fusion polyprotein yielded a ∼191 kDa band in vitro, it produced ∼78 and ∼35 kDa fragments ex vivo. Collectively, the indispensability and functional effects of ‘PCP-catalytic’ and ‘X-substrate’ residues on HEV replication strongly supported a viral protease.
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