Determining the macropinocytic index of cells through a quantitative image-based assay.
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DOI：
10.1038/nprot.2014.004
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发表时间：
2014-01
期刊：
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14.8
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中科院分区：
文献类型：
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作者：
巨胞饮作用作为细胞外液及其内容物的内化途径，并且在癌基因表达细胞中上调。最近，我们已经揭示了巨胞饮作用在通过细胞外白蛋白的内化来促进癌细胞生长中的功能作用，细胞外白蛋白被降解为细胞内氨基酸的可用来源。由于缺乏能够定量测量这种摄取机制的可靠测定，过去评估巨胞饮一直具有挑战性。在这里，我们描述了一个协议，用于可视化和量化的程度巨胞饮在癌细胞在培养和体内。使用这种方法，可以在1-2天内确定特定癌细胞系或皮下肿瘤的“巨胞饮指数”。该方案可以使用多个样本并行进行，并且可以轻松适用于各种细胞类型和异种移植/同种移植小鼠模型。
Macropinocytosis serves as an internalization pathway for extracellular fluid and its contents and is upregulated in oncogene-expressing cells. Recently, we have revealed a functional role for macropinocytosis in fueling cancer cell growth through the internalization of extracellular albumin, which is degraded into a usable source of intracellular amino acids. Assessing macropinocytosis has been challenging in the past due to the lack of reliable assays capable of quantitatively measuring this uptake mechanism. Here, we describe a protocol for visualizing and quantifying the extent of macropinocytosis in cancer cells both in culture and in vivo. Using this approach, the ‘Macropinocytic Index’ of a particular cancer cell line or subcutaneous tumor can be ascertained within 1–2 days. The protocol can be carried out with multiple samples in parallel and can be easily adapted for a variety of cell types and xenograft/allograft mouse models.
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