Red fluorescent protein-based cAMP indicator applicable to optogenetics and in vivo imaging.
Red fluorescent protein-based cAMP indicator applicable to optogenetics and in vivo imaging.
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DOI：
10.1038/s41598-017-07820-6
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发表时间：
2017-08-04
影响因子：
4.6
通讯作者：
Kitaguchi T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Harada K;Ito M;Wang X;Tanaka M;Wongso D;Konno A;Hirai H;Hirase H;Tsuboi T;Kitaguchi T
cAMP是一种常见的第二信使，参与各种生理过程。为了扩展可用cAMP指示剂的调色板，我们开发了一种红色cAMP指示剂，名为“Pink Flamindo”（粉色荧光cAMP指示剂）。在饱和剂量的cAMP存在下，粉红色Flamindo的荧光强度增加4.2倍，激发和发射峰分别在567 nm和590 nm处。活细胞成像显示，粉红色Flamindo是有效的监测光活化腺苷酸环化酶响应蓝光产生的细胞内cAMP的时空动态，并在双色成像研究中使用的绿色Ca 2+指示剂（G-GECO）。此外，我们通过双光子成像成功地监测了大脑皮质星形胶质细胞中cAMP水平的体内升高。我们建议，粉红色Flamindo将促进未来在体内，细胞信号传导和cAMP动力学的光遗传学研究。
cAMP is a common second messenger that is involved in various physiological processes. To expand the colour palette of available cAMP indicators, we developed a red cAMP indicator named “Pink Flamindo” (Pink Fluorescent cAMP indicator). The fluorescence intensity of Pink Flamindo increases 4.2-fold in the presence of a saturating dose of cAMP, with excitation and emission peaks at 567 nm and 590 nm, respectively. Live-cell imaging revealed that Pink Flamindo is effective for monitoring the spatio-temporal dynamics of intracellular cAMP generated by photoactivated adenylyl cyclase in response to blue light, and in dual-colour imaging studies using a green Ca2+ indicator (G-GECO). Furthermore, we successfully monitored the elevation of cAMP levels in vivo in cerebral cortical astrocytes by two-photon imaging. We propose that Pink Flamindo will facilitate future in vivo, optogenetic studies of cell signalling and cAMP dynamics.
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