Use of shRNA for stable suppression of chemokine receptor expression and function in human cancer cell lines.
Use of shRNA for stable suppression of chemokine receptor expression and function in human cancer cell lines.
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DOI：
10.1007/978-1-4939-0928-5_19
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Lokeshwar, Bal L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Salazar, Nicole;Munoz, Daniel;Hoy, James;Lokeshwar, Bal L.
在本章中，我们描述了一种在脂质转染环境中使用shRNA稳定沉默人类癌细胞中的趋化因子受体CXCR7的方案，该方案先前由我们的实验室发表。我们提供了有关shRNA过程的详细信息和背景信息，以阐明该过程的重要性。在U6启动子的控制下，我们将CXCR7 shRNA和重组序列shRNA克隆到pr质粒中稳定表达。用Lipofectamine 2000转染人癌细胞shRNA-pRS。从转染的培养基中选择稳定表达shRNA的细胞，在含有选定抗生素嘌呤霉素的培养基中培养2周。分别用q-PCR和兔抗CXCR7 IgG免疫印迹法检测突现细胞菌落对CXCR7 mRNA和蛋白表达的抑制。
In this chapter, we describe a protocol used for stable silencing of chemokine receptor CXCR7 in human cancer cells using shRNA in a lipid transfection setting, previously published by our laboratory. We provide thorough detail and background information about the process of shRNA to clarify the importance of this process. We use CXCR7 shRNA and scrambled sequence shRNA constructs cloned into a pRS plasmid under the control of a U6 promoter for stable expression. Human cancer cells are transfected with shRNA-pRS using Lipofectamine 2000. Cells stably expressing the shRNA are selected from transfected cultures following 2 weeks in medium containing the selection antibiotic puromycin. The emergent cell colonies are evaluated for knockdown of CXCR7 mRNA and protein expression by q-PCR and immunoblotting with rabbit anti-CXCR7 IgG, respectively.
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