Do more with Less: Improving High Parameter Cytometry Through Overnight Staining.
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DOI：
10.1002/cpz1.589
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发表时间：
2022-11
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Burton, Oliver T.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Whyte, Carly E.;Tumes, Damon J.;Liston, Adrian;Burton, Oliver T.
关键词：
流式细胞术的最新进展使生物现象的高维表征成为可能，使许多领域的突破成为可能。尽管在高参数面板设计中，人们欣赏抗原和荧光团的独特性质，但对于短表面污渍，染色条件通常是标准化的，而不考虑抗体的亲和力或抗原的可及性。在这里，我们展示了增加抗体孵育时间如何在灵敏度、保持特异性和减少背景方面带来实质性的改善，同时还显著降低了高参数细胞仪面板的成本。此外，过夜染色减少了实验间变异性的影响，有助于在延长的时间过程中准确地合并实验。我们就如何优化不同抗原的染色条件提供指导，包括不同的固定策略如何影响表位的可及性。因此，过夜染色可以显著提高高参数细胞术的分辨率、重复性和成本效益。©2022作者。由威利期刊有限责任公司出版的现行协议。
Recent advances in flow cytometry have allowed high‐dimensional characterization of biological phenomena, enabling breakthroughs in a multitude of fields. Despite the appreciation of the unique properties of antigens and fluorophores in high‐parameter panel design, staining conditions are often standardized for short surface stains, regardless of antibody affinity or antigen accessibility. Here, we demonstrate how increasing antibody incubation times can lead to substantial improvements in sensitivity, maintaining specificity, and reducing background, while also significantly reducing the costs of high‐parameter cytometry panels. Furthermore, overnight staining reduces the influence of interexperimental variability, assisting accurate pooling over experiments over extended time courses. We provide guidance on how to optimize staining conditions for diverse antigens, including how different fixation strategies can affect epitope accessibility. Overnight staining can thus substantially improve the resolution, repeatability, and cost‐effectiveness of high‐parameter cytometry. © 2022 The Authors. Current Protocols published by Wiley Periodicals LLC.
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