The RelA nuclear localization signal folds upon binding to IκBα.
The RelA nuclear localization signal folds upon binding to IκBα.
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DOI：
10.1016/j.jmb.2010.10.055
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发表时间：
2011-01-21
影响因子：
5.6
通讯作者：
Komives EA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cervantes CF;Bergqvist S;Kjaergaard M;Kroon G;Sue SC;Dyson HJ;Komives EA
RelA 的核定位信号 (NLS) 多肽是典型的 NFκB 家族成员，负责调节含有 RelA 的 NFκB 二聚体的核定位。 RelA NLS 多肽还在介导含有 RelA 的二聚体与抑制剂 IκBα 相互作用的高亲和力和特异性方面发挥着至关重要的作用，根据已发表的 X 射线晶体结构形成两个螺旋基序。为了确定溶液条件下 RelA NLS 和 IκBα 之间相互作用的性质，我们使用包含残基 67-206 的 IκBα 截短形式和跨越 RelA 残基 293-321 的肽进行 NMR 和等温滴定量热法 (ITC) 研究。 NLS 肽虽然大部分未折叠，但在溶液中游离时具有微弱的螺旋结构倾向。将标记的肽添加到未标记的 IκBα 中后，NMR 谱中的共振色散明显更大，这提供了 RelA NLS 多肽在结合 IκBα 时折叠的明确证据。 ITC 对单点突变体的研究表明，残基 F309 位于 IκBα 结合的 RelA NLS 多肽中两个螺旋（螺旋 4）较 C 端的中间，对于 RelA NLS 多肽与 IκBα 的结合至关重要。这些结果有助于解释螺旋 4 在介导 RelA 对 IκBα 的高亲和力中的作用。
The nuclear localization signal (NLS) polypeptide of RelA, the canonical NFκB family member, is responsible for regulating the nuclear localization of RelA-containing NFκB dimers. The RelA NLS polypeptide also plays a crucial role in mediating the high affinity and specificity of the interaction of RelA-containing dimers with the inhibitor IκBα, forming two helical motifs according to the published X-ray crystal structure. In order to define the nature of the interaction between the RelA NLS and IκBα under solution conditions, we conducted NMR and isothermal titration calorimetry (ITC) studies using a truncated form of IκBα containing residues 67-206 and a peptide spanning residues 293-321 of RelA. The NLS peptide, though largely unfolded, has a weak tendency toward helical structure when free in solution. Upon addition of the labeled peptide to unlabeled IκBα, the resonance dispersion in the NMR spectrum is significantly greater, providing definitive evidence that the RelA NLS polypeptide folds upon binding IκBα. ITC studies of single-point mutants reveal that residue F309, which is located in the middle of the more C-terminal of the two helices (helix 4) in the IκBα-bound RelA NLS polypeptide, is critical for the binding of the RelA NLS polypeptide to IκBα. These results help to explain the role of helix 4 in mediating the high affinity of RelA for IκBα.
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