CRISPR/Cas9-Mediated α-ENaC Knockout in a Murine Pancreatic β-Cell Line.
CRISPR/Cas9-Mediated α-ENaC Knockout in a Murine Pancreatic β-Cell Line.
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CRISPR/Cas9介导的小鼠胰腺β细胞系中的α-ENaC敲除
DOI：
10.3389/fgene.2021.664799
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发表时间：
2021
影响因子：
3.7
通讯作者：
Liang X
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhang X;Zhao L;Jin R;Li M;Li MS;Li R;Liang X
许多离子通道参与控制胰腺β细胞的胰岛素合成和分泌。上皮钠通道（ENaC）在人胰腺组织中表达，但 ENaC 在胰腺 β 细胞中的生物学作用仍不清楚。在这里，我们应用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术敲除小鼠胰腺 β 细胞系（MIN6 细胞）中的 α-ENaC 基因。为 α-ENaC 的外显子设计了四个单引导 RNA (sgRNA) 位点。构建活性较高的sgRNA1和sgRNA3并共转染MIN6细胞。通过药物筛选、克隆、测序等一系列实验流程，获得了MIN6细胞中的α-ENaC基因敲除（α-ENaC−/−）。与野生型MIN6细胞相比，α-ENaC−/− MIN6细胞的细胞活力和胰岛素含量显着增加。因此，通过CRISPR/Cas9技术产生的α-ENaC−/− MIN6细胞为研究α-ENaC在胰腺β细胞中的生物学功能提供了有效的工具。
Many ion channels participate in controlling insulin synthesis and secretion of pancreatic β-cells. Epithelial sodium channel (ENaC) expressed in human pancreatic tissue, but the biological role of ENaC in pancreatic β-cells is still unclear. Here, we applied the CRISPR/Cas9 gene editing technique to knockout α-ENaC gene in a murine pancreatic β-cell line (MIN6 cell). Four single-guide RNA (sgRNA) sites were designed for the exons of α-ENaC. The sgRNA1 and sgRNA3 with the higher activity were constructed and co-transfected into MIN6 cells. Through processing a series of experiment flow included drug screening, cloning, and sequencing, the α-ENaC gene-knockout (α-ENaC−/−) in MIN6 cells were obtained. Compared with the wild-type MIN6 cells, the cell viability and insulin content were significantly increased in α-ENaC−/− MIN6 cells. Therefore, α-ENaC−/− MIN6 cells generated by CRISPR/Cas9 technology added an effective tool to study the biological function of α-ENaC in pancreatic β-cells.
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