Cloning and characterization of EF-Tu and EF-Ts from Pseudomonas aeruginosa.
Cloning and characterization of EF-Tu and EF-Ts from Pseudomonas aeruginosa.
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DOI：
10.1155/2013/585748
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发表时间：
2013
影响因子：
--
通讯作者：
Bullard JM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Palmer SO;Rangel EY;Montalvo AE;Tran AT;Ferguson KC;Bullard JM
我们从铜绿假单胞菌中克隆了延伸因子Ef-Tu和Ef-ts的编码基因，并进行了表达和纯化，其同源性大于95%。序列分析表明，铜绿假单胞菌Ef-Tu和Ef-ts与大肠杆菌Ef-Tu和Ef-ts的同源性分别为84%和55%。在GDP交换试验中，铜绿假单胞菌EF-Tu具有活性。在无EF-ts条件下，EF-Tu与GDP值相互作用的动力学参数分别为KM=33 μM，k CAT OBS=0.003 S−1，其特异度常数k CAT Obs/KM为0.1×10−3 S−1 μM−1.在EF-TS存在下，KM=2 μM，k CAT bs=0.005 S−1，特异度常数k CAT OBS/KM为2.5×10−3 S−1 μM−1，平衡解离常数分别为30~75 nM和12 5~2 0 0 nM。Ef-Tt比Ef-Tu刺激GDP交换10倍。铜绿假单胞菌EF-Tu能与GTP和氨酰化tRNA形成三元复合体，并参与Phe-tRNAPhe在铜绿假单胞菌核糖体A位的聚(U)依赖性结合。铜绿假单胞菌EF-Tu在由铜绿假单胞菌所有组分组成的多聚(U)程序聚苯丙氨酸蛋白质合成系统中具有活性。
We have cloned genes encoding elongation factors EF-Tu and EF-Ts from Pseudomonas aeruginosa and expressed and purified the proteins to greater than 95% homogeneity. Sequence analysis indicated that P. aeruginosa EF-Tu and EF-Ts are 84% and 55% identical to E. coli counterparts, respectively. P. aeruginosa EF-Tu was active when assayed in GDP exchange assays. Kinetic parameters for the interaction of EF-Tu with GDP in the absence of EF-Ts were observed to be K M = 33 μM, k cat obs = 0.003 s−1, and the specificity constant k cat obs/K M was 0.1 × 10−3 s−1 μM−1. In the presence of EF-Ts, these values were shifted to K M = 2 μM, k cat obs = 0.005 s−1, and the specificity constant k cat obs/K M was 2.5 × 10−3 s−1 μM−1. The equilibrium dissociation constants governing the binding of EF-Tu to GDP (K GDP) were 30–75 nM and to GTP (K GTP) were 125–200 nM. EF-Ts stimulated the exchange of GDP by EF-Tu 10-fold. P. aeruginosa EF-Tu was active in forming a ternary complex with GTP and aminoacylated tRNA and was functional in poly(U)-dependent binding of Phe-tRNAPhe at the A-site of P. aeruginosa ribosomes. P. aeruginosa EF-Tu was active in poly(U)-programmed polyphenylalanine protein synthesis system composed of all P. aeruginosa components.
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影响因子：
64.8
作者：
Kawashima, T;BerthetColominas, C;Leberman, R
通讯作者：
Leberman, R
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作者：
LOUIE, A;JURNAK, F
通讯作者：
JURNAK, F
DOI：
10.1016/0006-291x(70)90341-4
发表时间：
1970-01-01
影响因子：
3.1
作者：
MILLER, DL;WEISSBACH, H
通讯作者：
WEISSBACH, H
影响因子：
2.9
作者：
Gromadski, KB;Wieden, HJ;Rodnina, MV
通讯作者：
Rodnina, MV
DOI：
10.1016/0167-4781(90)90168-2
发表时间：
1990-08-27
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA
影响因子：
--
作者：
JURNAK, F;HEFFRON, S;DELARIA, K
通讯作者：
DELARIA, K