Codon-Optimized NADH Oxidase Gene Expression and Gene Fusion with Glycerol Dehydrogenase for Bienzyme System with Cofactor Regeneration.
Codon-Optimized NADH Oxidase Gene Expression and Gene Fusion with Glycerol Dehydrogenase for Bienzyme System with Cofactor Regeneration.
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密码子优化的 NADH 氧化酶基因表达以及与甘油脱氢酶的基因融合，用于具有辅因子再生的双酶系统。
DOI：
10.1371/journal.pone.0128412
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Wang S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fang B;Jiang W;Zhou Q;Wang S
NADH氧化酶（NOXs）通过催化辅助因子再生，在维持NAD+/NADH平衡中发挥重要作用。研究了短乳杆菌nox基因在大肠杆菌BL21 （BL21 (DE3)）中的表达。在起始密码子附近区域高at含量和整个基因序列密码子使用与宿主一致两种策略下，NOX活性分别达到59.9 U/mg和73.3 U/mg（粗酶），表达量分别提高2.0倍和2.5倍。纯化NOX活性为213.8 U/mg。甘油脱氢酶（GDH）与NOX基因融合形成双导多酶，用于甘油生物转化和辅酶再生。GDH-NOX对不同底物甘油和NADH的动力学参数分别为V max(glycerol) 20 μM/min、K m(glycerol) 19.4 mM、V max(NADH) 12.5 μM/min和K m(NADH) 51.3 μM，表明了GDH-NOX在甘油快速分析和二氧丙酮生物合成中的应用前景。
NADH oxidases (NOXs) play an important role in maintaining balance of NAD+/NADH by catalyzing cofactors regeneration. The expression of nox gene from Lactobacillus brevis in Escherichia coli BL21 (BL21 (DE3)) was studied. Two strategies, the high AT-content in the region adjacent to the initiation codon and codon usage of the whole gene sequence consistent with the host, obtained the NOX activity of 59.9 U/mg and 73.3 U/mg (crude enzyme), with enhanced expression level of 2.0 and 2.5-folds, respectively. Purified NOX activity was 213.8 U/mg. Gene fusion of glycerol dehydrogenase (GDH) and NOX formed bifuctional multi-enzymes for bioconversion of glycerol coupled with coenzyme regeneration. Kinetic parameters of the GDH-NOX for each substrate, glycerol and NADH, were calculated as V max(Glycerol) 20 μM/min, K m(Glycerol) 19.4 mM, V max (NADH) 12.5 μM/min and K m (NADH) 51.3 μM, respectively, which indicated the potential application of GDH-NOX for quick glycerol analysis and dioxyacetone biosynthesis.
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DOI：
10.1152/ajprenal.00218.2001
发表时间：
2002-06-01
影响因子：
4.2
作者：
Li, N;Yi, FX;Zou, AP
通讯作者：
Zou, AP
影响因子：
2.7
作者：
Hong, Su Young;Lee, Jin Suk;Yun, Han Dae
通讯作者：
Yun, Han Dae
DOI：
10.1126/science.1170160
发表时间：
2009-04-10
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Kudla G;Murray AW;Tollervey D;Plotkin JB
通讯作者：
Plotkin JB
影响因子：
2.7
作者：
Hummel, W;Riebel, B
通讯作者：
Riebel, B
影响因子：
4.7
作者：
Marin, Monica
通讯作者：
Marin, Monica