Metal-Binding Activity of the Soluble Recombinant Pig Metallothionein 1A Expressed in Escherichia coli
Metal-Binding Activity of the Soluble Recombinant Pig Metallothionein 1A Expressed in Escherichia coli
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大肠杆菌中表达的可溶性重组猪金属硫蛋白 1A 的金属结合活性
DOI：
10.1007/s12011-012-9470-1
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发表时间：
2012-07
影响因子：
3.9
通讯作者：
Jun Bao
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dongbo Sun;Hong Zhang;Guojun Wu;Qinghe Zhu;Siwen Lv;Rui Wu;Jun Bao
根据Genbank中猪金属硫蛋白1A（MT 1A）基因序列，合成了猪MT 1A基因的全长cDNA，并将其克隆到pMD 18-T载体中。经序列分析和结构预测，将pMT 1A基因克隆到含有His标签的载体pET-32a（+）中。使用大肠杆菌Rosetta™（DE 3）plysS细胞以可溶形式表达重组pMT 1A（rpMT 1A）。Western blotting结果表明，纯化的rpMT 1A蛋白可与抗His标签单克隆抗体结合。进一步的研究表明，rpMT 1A蛋白与二价金属离子铜（Cu² C）、锌（Zn² C）和镉（Cd² C）表现出高的金属结合活性。
Full-length cDNA for the pig metallothionein 1A (pMT1A) gene was synthesized based on the pig MT1A gene sequence in Genbank and cloned into the pMD18-T vector. After sequence analysis and structure prediction, the pMT1A gene was cloned into vector pET-32a (+) containing a His-tag. The recombinant pMT1A (rpMT1A) was expressed in a soluble form using Escherichia coli Rosetta™ (DE3) plysS cells. Western blotting showed that the purified rpMT1A protein bound an anti-His-tag monoclonal antibody. Further investigation revealed that the rpMT1A protein showed high metal-binding activity with the divalent metal ions copper (Cu²⁺), zinc (Zn²⁺), and cadmium (Cd²⁺).
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