Gene Knockout in Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Followed by Granulocytic Differentiation.
Gene Knockout in Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Followed by Granulocytic Differentiation.
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造血干细胞和祖细胞中的基因敲除随后进行粒细胞分化
DOI：
10.1007/978-1-0716-0290-4_26
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发表时间：
2020
影响因子：
--
通讯作者：
Klimiankou M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ritter M;Welte K;Skokowa J;Klimiankou M
在本章中，我们提出了一种优化的CRISPR/Cas9 RNP核转染方法，用于造血干细胞和祖细胞（hspc）的基因敲除（KO）。利用实验证明的活性位点特异性sgrna，我们通常在HSPCs中达到80%以上的基因KO，从而避免了细胞分选或靶细胞群富集的需要。此外，我们提供了基因KO后HSPCs体外粒细胞分化的方案，并详细描述了可用于研究特定基因KO影响的粒细胞功能测试。
In this chapter, we present an optimized CRISPR/Cas9 RNP nucleofection approach for gene knockout (KO) in hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs). With experimentally proved active locus-specific sgRNAs, we routinely reach over 80% gene KO in HSPCs, thus avoiding the need for cell sorting or enrichment of targeted cell population. Additionally, we provide a protocol for in vitro granulocytic differentiation of HSPCs after gene KO and detailed description of granulocyte function tests which can be applied to study the effects of a particular gene KO.
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作者：
Jae Bum Kim;S. Blackshaw
通讯作者：
S. Blackshaw
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作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
DOI：
10.1126/science.aad5227
发表时间：
2016-01-01
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Slaymaker IM;Gao L;Zetsche B;Scott DA;Yan WX;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
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作者：
通讯作者：
--
影响因子：
7.5
作者：
Nasri, Masoud;Mir, Perihan;Skokowa, Julia
通讯作者：
Skokowa, Julia