Utilizing the FLP-Out System for Clonal RNAi Analysis in the Adult Drosophila Ovary.
Utilizing the FLP-Out System for Clonal RNAi Analysis in the Adult Drosophila Ovary.
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利用 FLP-Out 系统对成年果蝇卵巢进行克隆 RNAi 分析。
DOI：
10.1007/978-1-0716-2970-3_4
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ables,ElizabethT
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Phipps,DanielN;Powell,AmandaM;Ables,ElizabethT
利用UAS/Gal 4系统进行空间控制的RNA干扰（RNAi）基因敲除是目前研究果蝇基因功能的最有吸引力的技术之一。虽然在发育生物体的体细胞中的基因敲低实验（即，胚胎和幼虫）中进行，但在成体卵巢细胞中使用RNAi可能受到“脱靶”发育组织中Gal 4表达的非预期有害作用的阻碍。镶嵌分析克服了这些问题，赋予时间和空间控制基因操作，提供了一个有用的工具，比较操纵的细胞与野生型细胞在同一组织。在这里，我们提供了一种方法，利用UAS/Gal 4系统与Flippase（FLP）-Flippase Recognition Target（FRT）系统相结合，在果蝇的生殖系和索马中产生阳性标记的“FLP-Out”克隆，表达所选的RNAi。该协议概述了克隆的产生和选择适当的苍蝇股票和试剂的每一个步骤，提供了一个指南，这个强大的工具在theDrosophilagenetic工具箱。这些技术允许在特定细胞类型内进行RNAi分析，提供了研究细胞功能的各种独特方面的机会，这在更传统的基于RNAi的实验中是不可能的。
The ability to conduct spatially controlled RNA interference (RNAi) for gene knockdown using the UAS/Gal4 system is among the most appealing techniques available for analysis of gene function in theDrosophilaovary. While gene knockdown experiments in somatic cells in the developing organism (i.e., embryos and larvae) are effectively and commonly performed, the use of RNAi in adult ovarian cells can be hampered by the unintended deleterious effects of Gal4 expression in “off-target” developing tissues. Mosaic analysis overcomes these problems by imparting temporal and spatial control over gene manipulation, providing a useful tool to compare manipulated cells with wild-type cells in the same tissue. Here, we provide a method to utilize the UAS/Gal4 system in combination with the Flippase (FLP)-Flippase Recognition Target (FRT) system to generate positively labeled “FLP-Out” clones expressing a chosen RNAi in both the germline and the soma in theDrosophilaovary. This protocol outlines each step of the generation of clones and the selection of appropriate fly stocks and reagents, providing a guide to this powerful tool in theDrosophilagenetic toolbox. These techniques allow for RNAi analysis within a specific cell type, providing an opportunity to study a variety of unique aspects of cell function that would not be possible in more traditional RNAi-based experiments.
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