Single-cell systems biology by super-resolution imaging and combinatorial labeling.
Single-cell systems biology by super-resolution imaging and combinatorial labeling.
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DOI：
10.1038/nmeth.2069
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发表时间：
2012-06-03
期刊：
影响因子：
48
通讯作者：
Cai, Long
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lubeck, Eric;Cai, Long
荧光显微镜是探索单细胞调控网络的有力定量工具。然而，可以同时测量的分子种类的数量受到荧光团的光谱分离性的限制。在这里，我们展示了一个简单但通用的策略，通过使用光学超分辨率显微镜（SRM）和组合标记，大大提高了单细胞中分子的多重检测能力。作为原理的证明，我们使用荧光原位杂交（FISH）用荧光团的独特组合标记mRNA，并使用SRM解析荧光团的序列和组合。我们同时测定了单个S.酿酒酵母细胞这些实验表明，单细胞的组合标记和超分辨率成像提供了一种将系统生物学引入单细胞的自然方法。
Fluorescence microscopy is a powerful quantitative tool for exploring regulatory networks in single cells. However, the number of molecular species that can be measured simultaneously is limited by the spectral separability of fluorophores. Here we demonstrate a simple but general strategy to drastically increase the capacity for multiplex detection of molecules in single cells by using optical super-resolution microscopy (SRM) and combinatorial labeling. As a proof of principle, we labeled mRNAs with unique combinations of fluorophores using Fluorescence in situ Hybridization (FISH), and resolved the sequences and combinations of fluorophores with SRM. We measured the mRNA levels of 32 genes simultaneously in single S. cerevisiae cells. These experiments demonstrate that combinatorial labeling and super-resolution imaging of single cells provides a natural approach to bring systems biology into single cells.
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影响因子：
48
作者：
Dempsey, Graham T.;Vaughan, Joshua C.;Chen, Kok Hao;Bates, Mark;Zhuang, Xiaowei
通讯作者：
Zhuang, Xiaowei
影响因子：
16.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
48
作者：
Raj, Arjun;van den Bogaard, Patrick;Rifkin, Scott A.;van Oudenaarden, Alexander;Tyagi, Sanjay
通讯作者：
Tyagi, Sanjay
影响因子：
3.4
作者：
Thompson, RE;Larson, DR;Webb, WW
通讯作者：
Webb, WW
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56.9
作者：
Yildiz, A;Forkey, JN;Selvin, PR
通讯作者：
Selvin, PR