The Red Flour Beetle as Model for Comparative Neural Development: Genome Editing to Mark Neural Cells in Tribolium Brain Development.
The Red Flour Beetle as Model for Comparative Neural Development: Genome Editing to Mark Neural Cells in Tribolium Brain Development.
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红面甲虫作为比较神经发育的模型：基因组编辑标记谷盗大脑发育中的神经细胞
DOI：
10.1007/978-1-4939-9732-9_11
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发表时间：
2019
影响因子：
--
通讯作者：
Bucher
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Farnworth;Eckermann;Mühlen;Bucher
有了CRISPR/Cas（随机间隔短回文重复序列/CRISPR相关），研究赤拟谷盗的科学家现在可以在他们感兴趣的区域产生具有位点特异性插入的转基因品系。我们提出了两种方法来产生在体内成像线适合标记的神经元与荧光蛋白的子集。第一种方法依赖于同源重组并使用2A肽来产生双顺反子mRNA。在这样的细胞系中，靶蛋白和标记蛋白不融合，而是以等量产生。这种工作密集型的方法相比，创建基因特异性增强子陷阱，不依赖于同源重组。这些基因的生成速度更快，但反映靶基因表达的精确度较低。选择哪种方法，在很大程度上取决于每个研究项目的目标，以及神经细胞及其发育如何标记的影响。我们描述了从设计构建体和指导RNA到胚胎注射和制备纯合原种的必要步骤。
With CRISPR/Cas (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated) scientists working withTribolium castaneumcan now generate transgenic lines with site-specific insertions at their region of interest. We present two methods to generate in vivo imaging lines suitable for marking subsets of neurons with fluorescent proteins. The first method relies on homologous recombination and uses a 2A peptide to create a bicistronic mRNA. In such lines, the target and the marker proteins are not fused but produced at equal amounts. This work-intensive method is compared with creating gene-specific enhancer traps that do not rely on homologous recombination. These are faster to generate but reflect the expression of the target gene less precisely. Which method to choose, strongly depends on the aims of each research project and in turn impacts of how neural cells and their development are marked. We describe the necessary steps from designing constructs and guide RNAs to embryonic injection and making homozygous stocks.
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