Robust genome and RNA editing via CRISPR nucleases in PiggyBac systems.
Robust genome and RNA editing via CRISPR nucleases in PiggyBac systems.
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DOI：
10.1016/j.bioactmat.2022.01.046
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发表时间：
2022-08
影响因子：
18.9
通讯作者：
Lian XL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jiang Y;Hoenisch RC;Chang Y;Bao X;Cameron CE;Lian XL
CRISPR/ cas介导的人类多能干细胞（hPSCs）基因组编辑为开发体外疾病建模、药物筛选和基于细胞的治疗提供了前所未有的机会。为了有效地传递CRISPR组件，我们开发了两种包含Cas9/gRNA和诱导Cas13d/gRNA磁带的一体化载体，分别用于强大的基因组编辑和RNA干扰。这些载体利用了PiggyBac转座子系统，该系统允许在hPSCs中稳定表达CRISPR成分。Cas9载体PB-CRISPR在诱导蛋白编码基因和长链非编码rna的基因敲除方面均表现出高效率（高达99%）。另一种可诱导的Cas13d载体通过优化的gRNA设计实现了极高的RNA敲除效率（CD90敲除98%）。综上所述，我们的PiggyBac CRISPR载体可以作为研究hPSCs基因功能的强大工具包。PB-CRISPR能够强大地敲除在hPSCs中表达的基因。PB-CRISPR能够敲除hPSCs中的沉默基因。PB-CRISPR能够在hPSCs中稳健敲除lncrna。可诱导的piggyBac Cas13d系统可实现稳健的RNA敲低。
CRISPR/Cas-mediated genome editing in human pluripotent stem cells (hPSCs) offers unprecedented opportunities for developing in vitro disease modeling, drug screening and cell-based therapies. To efficiently deliver the CRISPR components, here we developed two all-in-one vectors containing Cas9/gRNA and inducible Cas13d/gRNA cassettes for robust genome editing and RNA interference respectively. These vectors utilized the PiggyBac transposon system, which allows stable expression of CRISPR components in hPSCs. The Cas9 vector PB-CRISPR exhibited high efficiency (up to 99%) of inducing gene knockout in both protein-coding genes and long non-coding RNAs. The other inducible Cas13d vector achieved extremely high efficiency in RNA knockdown (98% knockdown for CD90) with optimized gRNA designs. Taken together, our PiggyBac CRISPR vectors can serve as powerful toolkits for studying gene functions in hPSCs. PB-CRISPR enables robust knockout of genes expressed in hPSCs. PB-CRISPR enables robust knockout of silent genes in hPSCs. PB-CRISPR enables robust knockout of lncRNAs in hPSCs. Inducible piggyBac Cas13d system enables robust RNA knockdown.
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影响因子：
5.3
作者：
Pandey P;Zhang N;Curtis BR;Newman PJ;Denomme GA
通讯作者：
Denomme GA
影响因子：
3.7
作者：
Goodwin, Jacob;Laslett, Andrew L.;Rugg-Gunn, Peter J.
通讯作者：
Rugg-Gunn, Peter J.
DOI：
10.1126/science.aaf5573
发表时间：
2016-08-05
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Abudayyeh OO;Gootenberg JS;Konermann S;Joung J;Slaymaker IM;Cox DB;Shmakov S;Makarova KS;Semenova E;Minakhin L;Severinov K;Regev A;Lander ES;Koonin EV;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
CRISPR-C2C2的两种不同的RNase活性启用了指导RNA处理和RNA检测。
影响因子：
64.8
作者：
East-Seletsky A;O'Connell MR;Knight SC;Burstein D;Cate JH;Tjian R;Doudna JA
通讯作者：
Doudna JA
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle