Studying endoplasmic reticulum function in vitro using siRNA.
Studying endoplasmic reticulum function in vitro using siRNA.
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使用 siRNA 体外研究内质网功能。
DOI：
10.1007/978-1-60327-412-8_23
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发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Wilson CM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wilson CM
在真核细胞中，N-糖基化通常是发生在内质网（ER）腔中的最常见的蛋白质修饰。N-糖基化由称为寡糖基转移酶（OST）的大异源蛋白复合物促进，该蛋白复合物允许来自焦磷酸多萜醇供体bloconen的高甘露糖寡糖在易位到ER腔期间附着到新合成的新生链的合适天冬酰胺残基上（1）。虽然OST的复杂性在真核生物中是高度保守的，但其不同亚基的作用定义不清。我们已经研究了三个OST亚基，ER translocon相关的组件ribophorin I，和两个亚型的推定催化亚基，STT 3的功能。我们使用siRNA介导的单个蛋白质敲低与半透化哺乳动物细胞系统的组合，以在体外模型底物的N-糖基化期间提供OST亚基功能的稳健读出。这种方法同样适用于其他细胞成分的研究。
In eukaryotic cells, N-glycosylation is typically the most common protein modification that occurs in the endoplasmic reticulum (ER) lumen. N-glycosylation is facilitated by a large heterologous protein complex called the oligosaccharyltransferase (OST) that allows the attachment of a high mannose oligosaccharide from a dolichol pyrophosphate donoren bloconto suitable asparagine residues of newly synthesized nascent chains during translocation into the ER lumen (1). While the complexity of the OST is highly conserved in eukaryotes, the role of its different subunits is poorly defined. We have investigated the function of three OST subunits, the ER translocon-associated component ribophorin I, and two isoforms of the presumptive catalytic subunit, STT3. We use a combination of siRNA-mediated knockdown of individual proteins combined with a semi-permeabilized mammalian cell system to provide a robust read out for OST subunit function during N-glycosylation of model substrates in vitro. This approach is equally applicable to the study of other cellular components.
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DOI：
10.1073/pnas.94.10.4994
发表时间：
1997-05-13
影响因子：
11.1
作者：
Kelleher, DJ;Gilmore, R
通讯作者：
Gilmore, R
影响因子：
2.9
作者：
Shibatani, T;David, LL;Skach, WR
通讯作者：
Skach, WR
影响因子：
2.9
作者：
GUREVICH, VV;POKROVSKAYA, ID;ZOZULYA, SA
通讯作者：
ZOZULYA, SA
影响因子：
16
作者：
Kelleher, DJ;Karaoglu, D;Gilmore, R
通讯作者：
Gilmore, R
影响因子：
64.8
作者：
Elbashir, SM;Harborth, J;Tuschl, T
通讯作者：
Tuschl, T