Two Birds with One Stone: Parallel Quantification of Proteome and Phosphoproteome Using iTRAQ.

Two Birds with One Stone: Parallel Quantification of Proteome and Phosphoproteome Using iTRAQ.
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一石二鸟:使用 iTRAQ 并行定量蛋白质组和磷酸化蛋白质组

DOI:
10.1007/978-1-4939-3341-9_3
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发表时间:
2016
影响因子:
--
通讯作者:
Zahedi RP
Zahedi RP
中科院分区:
--
文献类型:
--
作者:
Solari FA;Kollipara L;Sickmann A;Zahedi RP

文献摘要

参考文献

被引文献

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蛋白质及其磷酸化状态的改变和异常水平与许多疾病有关。这种扰动的检测和定量可以提供对病理状况的更好理解,并有助于找到治疗或生物标志物的候选者。多年来,用于通过质谱法相对定量蛋白质和蛋白质磷酸化的同量异位质质量标签已经变得越来越流行。最常用的同量异位素化学标签之一是iTRAQ(相对和绝对定量同量异位素标签)。在典型的iTRAQ-8 plex实验中,多重样品量高达800 μg肽。使用最先进的LC-MS方法,只需要一小部分(~ 5%)这样的样品就可以在整体蛋白质组水平上生成全面的定量数据,因此大部分样品可以同时用于定量磷酸化蛋白质组学。在这里,我们提供了一种简单明了的方案,可以使用iTRAQ对同一样本的蛋白质组和磷酸蛋白质组进行定量分析。
Altered and abnormal levels of proteins and their phosphorylation states are associated with many disorders. Detection and quantification of such perturbations may provide a better understanding of pathological conditions and help finding candidates for treatment or biomarkers. Over the years, isobaric mass tags for relative quantification of proteins and protein phosphorylation by mass spectrometry have become increasingly popular. One of the most commonly used isobaric chemical tags is iTRAQ (isobaric tag for relative and absolute quantitation). In a typical iTRAQ-8plex experiment, a multiplexed sample amounts for up to 800 μg of peptides. Using state-of-the-art LC-MS approaches, only a fraction (~5 %) of such a sample is required to generate comprehensive quantitative data on the global proteome level, so that the bulk of the sample can be simultaneously used for quantitative phosphoproteomics. Here, we provide a simple and straightforward protocol to perform quantitative analyses of both proteome and phosphoproteome from the same sample using iTRAQ.
DOI: 10.1016/s0021-9673(00)96972-3
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