WGA-based lectin affinity gel electrophoresis: A novel method for the detection of O-GlcNAc-modified proteins.
WGA-based lectin affinity gel electrophoresis: A novel method for the detection of O-GlcNAc-modified proteins.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0180714
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Takekawa M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kubota Y;Fujioka K;Takekawa M
O-连接的β-N-乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）的翻译后修饰选择性地发生在细胞质和核蛋白的丝氨酸和/或苏氨酸残基上，并动态地调节其分子功能。由于评估特定蛋白质的O-GlcNAc酰化水平的常规策略需要耗时的步骤，因此开发用于检测和定量O-GlcNAc酰化蛋白质的快速且简单的方法一直是具有挑战性的问题。在这里，我们描述了一种新的方法，其中O-GlcNAc酰化和非O-GlcNAc酰化形式的蛋白质分离凝集素亲和凝胶电泳使用小麦胚芽凝集素（WGA），主要结合到N-乙酰葡糖胺残基。通过含有共聚WGA的凝胶的细胞裂解物的电泳选择性地诱导O-GlcNAc酰化蛋白质的移动性的阻滞，从而允许同时可视化O-GlcNAc酰化和未修饰形式的蛋白质。因此，该方法可用于定量检测O-GlcNAc酰化蛋白质。
Post-translational modification with O-linked β-N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) occurs selectively on serine and/or threonine residues of cytoplasmic and nuclear proteins, and dynamically regulates their molecular functions. Since conventional strategies to evaluate the O-GlcNAcylation level of a specific protein require time-consuming steps, the development of a rapid and easy method for the detection and quantification of an O-GlcNAcylated protein has been a challenging issue. Here, we describe a novel method in which O-GlcNAcylated and non-O-GlcNAcylated forms of proteins are separated by lectin affinity gel electrophoresis using wheat germ agglutinin (WGA), which primarily binds to N-acetylglucosamine residues. Electrophoresis of cell lysates through a gel containing copolymerized WGA selectively induced retardation of the mobility of O-GlcNAcylated proteins, thereby allowing the simultaneous visualization of both the O-GlcNAcylated and the unmodified forms of proteins. This method is therefore useful for the quantitative detection of O-GlcNAcylated proteins.
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