Uncovering genes required for neuronal morphology by morphology-based gene trap screening with a revertible retrovirus vector.
Uncovering genes required for neuronal morphology by morphology-based gene trap screening with a revertible retrovirus vector.
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通过基于形态学的基因陷阱筛选具有可再生逆转录病毒载体的基因捕获术所需的神经元形态所需的基因。
DOI：
10.1096/fj.12-207530
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发表时间：
2012-11
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Harada A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hashimoto Y;Muramatsu K;Kunii M;Yoshimura S;Yamada M;Sato T;Ishida Y;Harada R;Harada A
神经元形态和突触囊泡运输的分子机制在很大程度上是难以捉摸的，只有少数参与这些过程的分子已被确定。在这里，我们开发了一种新的基于形态学的基因陷阱方法，该方法理论上适用于所有细胞系，可以轻松快速地识别负责基因。使用这种方法，我们选择了几个基因诱捕克隆大鼠嗜铬细胞瘤PC 12细胞，显示异常的形态和突触囊泡样微泡（SLMV）的分布。我们确定了几个基因负责的表型，并分析了三个基因更详细。第一个基因是含有BTB/POZ结构域的蛋白9（Btbd 9），它与不宁腿综合征有关。第二个基因是细胞因子受体样因子3（Crlf 3），其在神经系统中的作用尚不清楚。第三个基因是单链DNA结合蛋白3（Ssbp 3），这是一种已知的调节头部形态发生的基因。这些结果表明，Btbd 9，Crlf 3和Ssbp 3调节神经元形态和突触囊泡的生物发生/运输。因为我们的新的基于形态学的基因陷阱方法是普遍适用的，这种方法是有希望的发现新的基因参与任何细胞系中的感兴趣的功能。桥本，Y.，Muramatsu，K.，Kunii，M.，Yoshimura，S.，Yamada，M.，佐藤，T.，Ishida，Y.，美国，原田河Harada，A.通过可逆逆转录病毒载体进行基于形态学的基因捕获筛选，揭示神经元形态所需的基因。
The molecular mechanisms of neuronal morphology and synaptic vesicle transport have been largely elusive, and only a few of the molecules involved in these processes have been identified. Here, we developed a novel morphology-based gene trap method, which is theoretically applicable to all cell lines, to easily and rapidly identify the responsible genes. Using this method, we selected several gene-trapped clones of rat pheochromocytoma PC12 cells, which displayed abnormal morphology and distribution of synaptic vesicle-like microvesicles (SLMVs). We identified several genes responsible for the phenotypes and analyzed three genes in more detail. The first gene was BTB/POZ domain-containing protein 9 (Btbd9), which is associated with restless legs syndrome. The second gene was cytokine receptor-like factor 3 (Crlf3), whose involvement in the nervous system remains unknown. The third gene was single-stranded DNA-binding protein 3 (Ssbp3), a gene known to regulate head morphogenesis. These results suggest that Btbd9, Crlf3, and Ssbp3 regulate neuronal morphology and the biogenesis/transport of synaptic vesicles. Because our novel morphology-based gene trap method is generally applicable, this method is promising for uncovering novel genes involved in the function of interest in any cell lines.—Hashimoto, Y., Muramatsu, K., Kunii, M., Yoshimura, S., Yamada, M., Sato, T., Ishida, Y., Harada, R., Harada, A. Uncovering genes required for neuronal morphology by morphology-based gene trap screening with a revertible retrovirus vector.
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