Identification of PAmKate as a Red Photoactivatable Fluorescent Protein for Cryogenic Super-Resolution Imaging.
Identification of PAmKate as a Red Photoactivatable Fluorescent Protein for Cryogenic Super-Resolution Imaging.
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DOI：
10.1021/jacs.8b05960
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发表时间：
2018-10-03
影响因子：
15
通讯作者：
Moerner WE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dahlberg PD;Sartor AM;Wang J;Saurabh S;Shapiro L;Moerner WE
在低温下对玻璃化样品进行的单分子超分辨荧光显微镜提供了更高的定位精度，这是由于减少了光漂白速度，不需要化学物质和快速固定方法，以及与低温电子显微镜相关的潜力。实现低温超分辨率显微镜需要有能力控制低温下发射标记的稀疏性。获得这种控制权是这项技术发展的一个关键挑战。在这项工作中，我们确定了一种红色的光激活蛋白PAMKate，它在低温下仍然可以激活。我们将其激活表征为温度的函数，并发现在低温和室温下激活是有效的。我们在原位进行低温超分辨实验，标记POPZ，这是一种已知在模式细菌新月弯杆菌的极地组装成微域的蛋白质。我们发现与室温相比，低温下的定位精度提高了4倍，这归因于减少了光漂白。
Single-molecule super-resolution fluorescence microscopy conducted in vitrified samples at cryogenic temperatures offers enhanced localization precision due to reduced photobleaching rates, a chemical-free and rapid fixation method, and the potential of correlation with cryogenic electron microscopy. Achieving cryogenic super-resolution microscopy requires the ability to control the sparsity of emissive labels at cryogenic temperatures. Obtaining this control presents a key challenge for the development of this technique. In this work, we identify a red photoactivatable protein, PAmKate, which remains activatable at cryogenic temperatures. We characterize its activation as a function of temperature and find that activation is efficient at cryogenic and room temperatures. We perform cryogenic super-resolution experiments in situ, labeling PopZ, a protein known to assemble into a microdomain at the poles of the model bacterium Caulobacter crescentus. We find improved localization precision at cryogenic temperatures compared to room temperature by a factor of 4, attributable to reduced photobleaching.
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影响因子：
3.4
作者：
Thompson, RE;Larson, DR;Webb, WW
通讯作者：
Webb, WW
DOI：
10.1073/pnas.0909204106
发表时间：
2009-12-15
影响因子：
11.1
作者：
Subach, Fedor V.;Malashkevich, Vladimir N.;Verkhusha, Vladislav V.
通讯作者：
Verkhusha, Vladislav V.
影响因子：
10.8
作者：
Kaufmann R;Schellenberger P;Seiradake E;Dobbie IM;Jones EY;Davis I;Hagen C;Grünewald K
通讯作者：
Grünewald K
用于超分辨率成像的电子倍增电荷耦合、科学互补金属氧化物半导体和电荷耦合器件的定位能力和局限性
影响因子：
3.5
作者：
Quan, Tingwei;Zeng, Shaoqun;Huang, Zhen-Li
通讯作者：
Huang, Zhen-Li
影响因子：
15
作者：
Henderson, J. Nathan;Gepshtein, Rinat;Remington, S. James
通讯作者：
Remington, S. James