Construction of Escherichia coli Mutant with Decreased Endotoxic Activity by Modifying Lipid A Structure.
Construction of Escherichia coli Mutant with Decreased Endotoxic Activity by Modifying Lipid A Structure.
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脂质A结构修饰内毒素活性降低的大肠杆菌突变体的构建
DOI：
10.3390/md13063388
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发表时间：
2015-05-27
期刊：
影响因子：
5.4
通讯作者：
Kong Q
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu Q;Li Y;Zhao X;Yang X;Liu Q;Kong Q
大肠杆菌BL21（DE3）及其衍生物广泛用于重组蛋白的生产，但这些纯化的蛋白总是被脂多糖（LPS）污染。 LPS 被哺乳动物免疫细胞的 Toll 样受体 4 和骨髓分化因子 2 复合物识别，并导致促炎细胞因子的释放。在用于治疗目的之前，从蛋白质中去除 LPS 是至关重要的一步。在本研究中，我们构建了 BL21 (DE3) ΔmsbB28 ΔpagP38 突变体，该突变体产生内毒性降低的五酰化 LPS。然后将携带 pagL 和/或 lpxE 的质粒引入该突变体中以进一步修饰 LPS。携带质粒pQK004（pagL和lpxE）的新菌株（S004）产生单磷酸化四酰化脂质A，其诱导RAW264.7中肿瘤坏死因子-α和THP1中IL-12的产生显着减少，但仍然保留产生重组蛋白的能力。这项研究提供了一种降低从大肠杆菌 BL21 背景中纯化的重组蛋白的内毒素活性的策略，以及一种修改脂质 A 结构以用于替代目的（例如单磷酰脂质 A (MPL) 作为疫苗佐剂）的可行方法。
Escherichia coli BL21 (DE3) and its derivatives are widely used for the production of recombinant proteins, but these purified proteins are always contaminated with lipopolysaccharide (LPS). LPS is recognized by the toll-like receptor 4 and myeloid differentiation factor 2 complex of mammalian immune cells and leads to release of pro-inflammatory cytokines. It is a vital step to remove LPS from the proteins before use for therapeutic purpose. In this study, we constructed BL21 (DE3) ∆msbB28 ∆pagP38 mutant, which produces a penta-acylated LPS with reduced endotoxicity. The plasmids harboring pagL and/or lpxE were then introduced into this mutant to further modify the LPS. The new strain (S004) carrying plasmid pQK004 (pagL and lpxE) produced mono-phosphoryated tetra-acylated lipid A, which induces markedly less production of tumor necrosis factor-α in the RAW264.7 and IL-12 in the THP1, but still retains ability to produce recombinant proteins. This study provides a strategy to decrease endotoxic activity of recombinant proteins purified from E. coli BL21 backgrounds and a feasible approach to modify lipid A structure for alternative purposes such as mono-phosphoryl lipid A (MPL) as vaccine adjuvants.
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影响因子：
4.8
作者：
Brown, Dusty B.;Muszynski, Artur;Carlson, Russell W.
通讯作者：
Carlson, Russell W.
影响因子：
4.8
作者：
Jia, WY;El Zoeiby, A;Bishop, RE
通讯作者：
Bishop, RE
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1985.tb08798.x
发表时间：
1985-01-01
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
GALANOS, C;LUDERITZ, O;SHIBA, T
通讯作者：
SHIBA, T
影响因子：
3.5
作者：
GALAN, JE;NAKAYAMA, K;CURTISS, R
通讯作者：
CURTISS, R
影响因子：
2.2
作者：
Cognet, I;de Coignac, AB;Gauchat, JF
通讯作者：
Gauchat, JF