Using patterned supported lipid membranes to investigate the role of receptor organization in intercellular signaling.
Using patterned supported lipid membranes to investigate the role of receptor organization in intercellular signaling.
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DOI：
10.1038/nprot.2011.302
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发表时间：
2011-04
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
细胞内部和外部的物理输入可以直接改变细胞表面受体的空间组织及其相关功能。在这里，我们描述了一种方案，它结合了固态纳米光刻和支持的脂膜技术来触发和操纵活细胞表面的特定受体，并发展了对空间组织和受体功能之间相互作用的理解。虽然现有的蛋白质构图技术能够向细胞呈现明确的蛋白质簇，但这一方案独特地允许控制膜间连接处横向流体受体-配体复合体的空间组织。免疫荧光和单细胞显微镜方法的结合以及互补的生化分析被用来表征受体信号通路和细胞功能。根据要研究的参数，该方案需要2-5d才能完成。原则上，该方案广泛适用于真核细胞，在此专门开发用于研究EphA2受体酪氨酸激酶在模型乳腺癌细胞系文库中的物理组织和转位的作用。
physical inputs, both internal and external to a cell, can directly alter the spatial organization of cell surface receptors and their associated functions. Here we describe a protocol that combines solid-state nanolithography and supported lipid membrane techniques to trigger and manipulate specific receptors on the surface of living cells and to develop an understanding of the interplay between spatial organization and receptor function. While existing protein-patterning techniques are capable of presenting cells with well-defined clusters of protein, this protocol uniquely allows for the control of the spatial organization of laterally fluid receptor-ligand complex at an intermembrane junction. a combination of immunofluorescence and single-cell microscopy methods and complementary biochemical analyses are used to characterize receptor signaling pathways and cell functions. the protocol requires 2–5 d to complete depending on the parameters to be studied. In principle, this protocol is widely applicable to eukaryotic cells and herein is specifically developed to study the role of physical organization and translocation of the EphA2 receptor tyrosine kinase across a library of model breast cancer cell lines.
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影响因子：
3.4
作者：
DeMond, Andrew L.;Mossman, Kaspar D.;Groves, Jay T.
通讯作者：
Groves, Jay T.
DOI：
10.1073/pnas.0902621106
发表时间：
2009-08-04
影响因子：
11.1
作者：
Hartman, Nina C.;Nye, Jeffrey A.;Groves, Jay T.
通讯作者：
Groves, Jay T.
影响因子：
56.9
作者：
Groves, JT;Ulman, N;Boxer, SG
通讯作者：
Boxer, SG
DOI：
10.1146/annurev.cellbio.042308.113408
发表时间：
2009
影响因子：
11.3
作者：
Muzzey D;van Oudenaarden A
通讯作者：
van Oudenaarden A
影响因子：
3.4
作者：
HALLETT, FR;WATTON, J;KRYGSMAN, P
通讯作者：
KRYGSMAN, P