High-Throughput Fluorometric Assay for Membrane-Protein Interaction.
High-Throughput Fluorometric Assay for Membrane-Protein Interaction.
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膜-蛋白质相互作用的高通量荧光测定。
DOI：
10.1007/978-1-4939-3170-5_14
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Hu,Yusi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cho,Wonhwa;Kim,Hyunjin;Hu,Yusi
膜-蛋白质相互作用在多种生物过程中起着关键作用。为了便于快速和灵敏地测量可溶性蛋白质的膜结合，我们开发了一种基于荧光的定量分析方法，该方法普遍适用于所有蛋白质。这种荧光猝灭方法使用荧光蛋白(FP)标记的蛋白质，当它们与含有合成脂质暗猝灭剂的囊泡结合时，其荧光强度大大降低，如N-dimethylaminoazobenzenesulfonylphosphatidylethanolamine(Dabsyl-PE)。这种简单的分析方法可以使用荧光分光光度计或平板阅读器进行，并针对具有不同FP和猝灭脂类组合的不同蛋白质进行了优化。该方法可以快速、灵敏和准确地测定各种脂类结合域和蛋白质的脂类特异性和亲和力，还可以高通量筛选调节蛋白质膜结合的小分子。
Membrane–protein interaction plays key roles in a wide variety of biological processes. To facilitate rapid and sensitive measurement of membrane binding of soluble proteins, we developed a fluorescence-based quantitative assay that is universally applicable to all proteins. This fluorescence-quenching assay employs fluorescence protein (FP)-tagged proteins whose fluorescence intensity is greatly decreased when they bind vesicles containing synthetic lipid dark quenchers, such as N-dimethylaminoazobenzenesulfonylphosphatidylethanolamine (dabsyl-PE). This simple assay can be performed with either a spectrofluorometer or a plate reader and optimized for different proteins with various combinations of FPs and quenching lipids. The assay allows rapid, sensitive, and accurate determination of lipid specificity and affinity for various lipid binding domains and proteins, and also high-throughput screening of small molecules that modulate membrane binding of proteins.
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影响因子：
64.8
作者：
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通讯作者：
ZAPOLSKI, EJ
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发表时间：
1983-12
期刊：
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--
作者：
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通讯作者：
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DOI：
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