Optimized surface markers for the prospective isolation of high-quality hiPSCs using flow cytometry selection.
Optimized surface markers for the prospective isolation of high-quality hiPSCs using flow cytometry selection.
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DOI：
10.1038/srep01179
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发表时间：
2013
影响因子：
4.6
通讯作者：
Flynn, Peter
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Abujarour, Ramzey;Valamehr, Bahram;Robinson, Megan;Rezner, Betsy;Vranceanu, Florin;Flynn, Peter
hiPSC 的衍生和选择仍然效率低下；高质量克隆的选择依赖于广泛的表征，这不适合高通量（HTP）方法。我们最近描述了使用小分子混合物来增强单细胞培养中 hiPSC 的存活和稳定性，以及在 hiPSC 的 HTP 衍生中使用流式细胞术细胞分选。在这里，我们报告了一种在基于 FACS 的选择中使用细胞表面标记物（包括 CD30）的优化组合来分离真正 hiPSC 的增强方案。从重编程培养物中去除 CD30+ 细胞几乎完全消除了 NANOG 和 OCT4 阳性亚群，表明它是多能细胞的关键标志物。在 FACS 中将 CD30 与 SSEA4 和 TRA-1-81 结合，大大增强了 hiPSC 选择和衍生的特异性和效率。目前的方法可以有效、自动化、前瞻性地从重编程细胞环境中分离出高质量的 hiPSC。
hiPSC derivation and selection remains inefficient; with selection of high quality clones dependent on extensive characterization which is not amenable to high-throughput (HTP) approaches. We recently described the use of a cocktail of small molecules to enhance hiPSC survival and stability in single cell culture and the use of flow cytometry cell sorting in the HTP-derivation of hiPSCs. Here we report an enhanced protocol for the isolation of bona fide hiPSCs in FACS-based selection using an optimized combination of cell surface markers including CD30. Depletion of CD30+ cells from reprogramming cultures almost completely abolished the NANOG and OCT4 positive sub-population, suggesting it is a pivotal marker of pluripotent cells. Combining CD30 to SSEA4 and TRA-1-81 in FACS greatly enhanced specificity and efficiency of hiPSC selection and derivation. The current method allows for the efficient and automated, prospective isolation of high-quality hiPSC from the reprogramming cell milieu.
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影响因子：
44.1
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
23.9
作者：
Saha K;Jaenisch R
通讯作者：
Jaenisch R
影响因子：
56.9
作者：
Yu, Junying;Vodyanik, Maxim A.;Thomson, James A.
通讯作者：
Thomson, James A.
影响因子：
3.7
作者：
Yuan SH;Martin J;Elia J;Flippin J;Paramban RI;Hefferan MP;Vidal JG;Mu Y;Killian RL;Israel MA;Emre N;Marsala S;Marsala M;Gage FH;Goldstein LS;Carson CT
通讯作者：
Carson CT
DOI：
10.1073/pnas.0711983105
发表时间：
2008-02-26
影响因子：
11.1
作者：
Lowry, W. E.;Richter, L.;Plath, K.
通讯作者：
Plath, K.