Multi-resolution correlative focused ion beam scanning electron microscopy: applications to cell biology.
Multi-resolution correlative focused ion beam scanning electron microscopy: applications to cell biology.
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DOI：
10.1016/j.jsb.2013.11.008
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发表时间：
2014-03
影响因子：
3
通讯作者：
Subramaniam, Sriram
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Narayan, Kedar;Danielson, Cindy M.;Lagarec, Ken;Lowekamp, Bradley C.;Coffman, Phil;Laquerre, Alexandre;Phaneuf, Michael W.;Hope, Thomas J.;Subramaniam, Sriram
关键词：
大视场内小目标的有效相关成像是细胞生物学中的一个核心问题。在这里，我们展示了聚焦离子束扫描电子显微镜（FIB-SEM）的一系列技术进步，以解决这个问题。我们提高了该工艺的速度、鲁棒性和自动化程度，并实现了约3 nm的一致z切片厚度。我们引入“关键帧成像”，同时成像大视场，并获得高分辨率的三维图像的目标子体积。我们将这些进展应用于HIV核心的融合后细胞质中间体的图像。使用荧光标记的细胞膜，蛋白质和HIV核心，我们首先通过荧光显微镜产生HIV感染细胞的“靶图”。然后，我们生成整个细胞的相关3D EM体积以及单个HIV核心的高分辨率3D图像，在单次自动化实验运行中实现了109体积尺度的相关成像。
Efficient correlative imaging of small targets within large fields is a central problem in cell biology. Here, we demonstrate a series of technical advances in focused ion beam scanning electron microscopy (FIB-SEM) to address this issue. We increase the speed, robustness and automation of the process, and achieve consistent z slice thickness of ~3 nm. We introduce “keyframe imaging” to simultaneously image large fields of view and obtain high-resolution 3D images of targeted sub-volumes. We apply these advances to image post-fusion cytoplasmic intermediates of the HIV core. Using fluorescently labeled cell membranes, proteins and HIV cores, we first produce a “target map” of an HIV infected cell by fluorescence microscopy. We then generate a correlated 3D EM volume of the entire cell as well as high-resolution 3D images of individual HIV cores, achieving correlative imaging across a volume scale of 109 in a single automated experimental run.
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影响因子：
3
作者：
Hildebrand, Mark;Kim, Sang;Shi, Dan;Scott, Keana;Subramaniam, Sriram
通讯作者：
Subramaniam, Sriram
影响因子：
9.8
作者：
Shu X;Lev-Ram V;Deerinck TJ;Qi Y;Ramko EB;Davidson MW;Jin Y;Ellisman MH;Tsien RY
通讯作者：
Tsien RY
影响因子：
3
作者：
Murphy, Gavin E.;Narayan, Kedar;Subramaniam, Sriram
通讯作者：
Subramaniam, Sriram
DOI：
10.1007/978-1-62703-137-0_16
发表时间：
2013-01-01
期刊：
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
影响因子：
--
作者：
Drobne, Damjana
通讯作者：
Drobne, Damjana
影响因子：
3.3
作者：
Campbell, Edward M.;Dodding, Mark P.;Hope, Thomas J.
通讯作者：
Hope, Thomas J.