Heritable CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.
Heritable CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0122353
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Franz AW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dong S;Lin J;Held NL;Clem RJ;Passarelli AL;Franz AW
体内靶向基因破坏是研究基因功能的有力工具。迄今为止，两种用于埃及伊蚊基因组编辑的工具已得到应用：锌指核酸酶（ZFN）和转录激活子样效应核酸酶（TALEN）。 ZFN 和 TALEN 难以使用标准分子生物学技术生产和验证，作为 ZFN 和 TALEN 的有前景的替代品，成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR 相关序列 9 (CRISPR/Cas9) 系统最近被发现是一种“DIY”基因组编辑工具。在这里，我们描述了 CRISPR/Cas9 在蚊子载体埃及伊蚊中的应用。在一个转基因蚊子系中，在分离但紧密连接的表达盒中，从眼组织特异性 3xP3 启动子表达 Dsred 和增强型青色荧光蛋白 (ECFP)，我们针对 ECFP 核苷酸序列进行破坏。当提供 Cas9 酶和两个靶向 ECFP 基因不同区域的 sgRNA 作为体外转录 mRNA 进行种系转化时，我们恢复了四个不同的 G1 池（敲除效率为 5.5%），其中个体仍然表达 DsRed 但不再表达 ECFP。 PCR 扩增、克隆和 PCR 扩增子测序揭示了 ECFP 靶基因中 2-27 个核苷酸的插入缺失。这些结果首次表明 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑在伊蚊中是可以实现的。埃及伊蚊，为该蚊种的进一步功能基因组学相关研究铺平了道路。
In vivo targeted gene disruption is a powerful tool to study gene function. Thus far, two tools for genome editing in Aedes aegypti have been applied, zinc-finger nucleases (ZFN) and transcription activator-like effector nucleases (TALEN). As a promising alternative to ZFN and TALEN, which are difficult to produce and validate using standard molecular biological techniques, the clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated sequence 9 (CRISPR/Cas9) system has recently been discovered as a "do-it-yourself" genome editing tool. Here, we describe the use of CRISPR/Cas9 in the mosquito vector, Aedes aegypti. In a transgenic mosquito line expressing both Dsred and enhanced cyan fluorescent protein (ECFP) from the eye tissue-specific 3xP3 promoter in separated but tightly linked expression cassettes, we targeted the ECFP nucleotide sequence for disruption. When supplying the Cas9 enzyme and two sgRNAs targeting different regions of the ECFP gene as in vitro transcribed mRNAs for germline transformation, we recovered four different G1 pools (5.5% knockout efficiency) where individuals still expressed DsRed but no longer ECFP. PCR amplification, cloning, and sequencing of PCR amplicons revealed indels in the ECFP target gene ranging from 2-27 nucleotides. These results show for the first time that CRISPR/Cas9 mediated gene editing is achievable in Ae. aegypti, paving the way for further functional genomics related studies in this mosquito species.
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影响因子：
3.8
作者：
Liu, Yuanyuan;Ma, Sanyuan;Xia, Qingyou
通讯作者：
Xia, Qingyou
影响因子：
3.8
作者：
Franz AW;Sanchez-Vargas I;Raban RR;Black WC 4th;James AA;Olson KE
通讯作者：
Olson KE
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
DOI：
10.1073/pnas.0701515104
发表时间：
2007-06-12
影响因子：
11.1
作者：
Adelman, Zach N.;Jasinskiene, Nijole;James, Anthony A.
通讯作者：
James, Anthony A.
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
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