Editing of the urease gene by CRISPR-Cas in the diatom Thalassiosira pseudonana.
Editing of the urease gene by CRISPR-Cas in the diatom Thalassiosira pseudonana.
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DOI：
10.1186/s13007-016-0148-0
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
5.1
通讯作者：
Mock T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hopes A;Nekrasov V;Kamoun S;Mock T
CRISPR-Cas 是分子工具箱中最新的强大补充，可实现可编程基因组编辑。它已被用于修改多种生物体的基因，但迄今为止仅适用于两种藻类。在这里，我们提出了一种使用 CRISPR-Cas 编辑假微型海链藻 (Thalassiosira pseudonana) 基因组的方法，这是一种以模型为中心的硅藻，具有生态意义和高生物技术潜力。使用金门克隆组装单个构建体。使用两个 sgRNA 在脲酶基因编码区的早期引入精确的 37 nt 缺失。在具有 CRISPR-Cas 构建体的克隆中观察到高比例的双等位基因突变 (≤61.5%)。与硝酸盐中的生长相比，双等位基因突变体在尿素中的生长导致生长速率和细胞大小显着降低。 CRISPR-Cas可以精确、高效地编辑拟南芥基因组。使用 Golden Gate 克隆组装 CRISPR-Cas 构建体为 CRISPR-Cas 方法提供了额外的灵活性，并有助于针对替代基因或物种进行修改。本文的在线版本 (doi:10.1186/s13007-016-0148-0) 包含补充材料，可供授权用户使用。
CRISPR-Cas is a recent and powerful addition to the molecular toolbox which allows programmable genome editing. It has been used to modify genes in a wide variety of organisms, but only two alga to date. Here we present a methodology to edit the genome of Thalassiosira pseudonana, a model centric diatom with both ecological significance and high biotechnological potential, using CRISPR-Cas. A single construct was assembled using Golden Gate cloning. Two sgRNAs were used to introduce a precise 37 nt deletion early in the coding region of the urease gene. A high percentage of bi-allelic mutations (≤61.5%) were observed in clones with the CRISPR-Cas construct. Growth of bi-allelic mutants in urea led to a significant reduction in growth rate and cell size compared to growth in nitrate. CRISPR-Cas can precisely and efficiently edit the genome of T. pseudonana. The use of Golden Gate cloning to assemble CRISPR-Cas constructs gives additional flexibility to the CRISPR-Cas method and facilitates modifications to target alternative genes or species. The online version of this article (doi:10.1186/s13007-016-0148-0) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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影响因子：
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作者：
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通讯作者：
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作者：
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Karplus, PA
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