A second essential function of the Est1-binding arm of yeast telomerase RNA.
A second essential function of the Est1-binding arm of yeast telomerase RNA.
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DOI：
10.1261/rna.049379.114
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发表时间：
2015-05
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Zappulla DC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lebo KJ;Niederer RO;Zappulla DC
核糖核蛋白端粒酶在包括人类在内的许多真核生物中维持端粒，并在衰老和癌症中发挥着核心作用。酿酒酵母端粒酶 RNA (TLC1) 是一种灵活的支架，可将端粒酶全酶蛋白亚基连接到复合物上。在这里，我们测试了这样一个假设：Est1 结合 TLC1 臂的长保守区域不仅仅贡献 Est1 结合功能。我们通过异源 RNA-蛋白结合模块将 TLC1 与 Est1 结合，将 Est1 结合与潜在的其他功能分开。我们发现，Est1 束缚可以挽救缺失 Est1 结合特别需要的核苷酸的端粒酶 RNA 等位基因的体内功能，但不能挽救那些缺失整个保守区域的端粒酶 RNA 等位基因的体内功能。然而，值得注意的是，在这种情况下，通过反式表达 TLC1 臂，端粒酶功能得以恢复。突变分析表明，第二必需 Est1-arm 结构域 (SEED) 映射到臂的内部环，SHAPE 化学图谱和 3D 建模表明该结构可以通过构象变化进行调节。最后，我们发现端粒酶招募到端粒后，SEED 在端粒酶功能中具有重要的、独立于 Est1 的作用。 SEED 可能是建立端粒延伸性或促进端粒酶 RNP 全酶活性所必需的。
The enzymatic ribonucleoprotein telomerase maintains telomeres in many eukaryotes, including humans, and plays a central role in aging and cancer. Saccharomyces cerevisiae telomerase RNA, TLC1, is a flexible scaffold that tethers telomerase holoenzyme protein subunits to the complex. Here we test the hypothesis that a lengthy conserved region of the Est1-binding TLC1 arm contributes more than simply Est1-binding function. We separated Est1 binding from potential other functions by tethering TLC1 to Est1 via a heterologous RNA-protein binding module. We find that Est1-tethering rescues in vivo function of telomerase RNA alleles missing nucleotides specifically required for Est1 binding, but not those missing the entire conserved region. Notably, however, telomerase function is restored for this condition by expressing the arm of TLC1 in trans. Mutational analysis shows that the Second Essential Est1-arm Domain (SEED) maps to an internal loop of the arm, which SHAPE chemical mapping and 3D modeling suggest could be regulated by conformational change. Finally, we find that the SEED has an essential, Est1-independent role in telomerase function after telomerase recruitment to the telomere. The SEED may be required for establishing telomere extendibility or promoting telomerase RNP holoenzyme activity.
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