Assay-ready Cryopreserved Cell Monolayers Enabled by Macromolecular Cryoprotectants.
Assay-ready Cryopreserved Cell Monolayers Enabled by Macromolecular Cryoprotectants.
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DOI：
10.1021/acs.biomac.2c00791
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发表时间：
2022-09-12
影响因子：
6.2
通讯作者：
Gibson, Matthew I.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tomas, Ruben M. F.;Bissoyi, Akalabya;Congdon, Thomas R.;Gibson, Matthew I.
细胞单层支持新药的发现和筛选，并允许进行细胞生物学和疾病的基础研究。然而，目前的低温保存技术不允许细胞在附着在组织培养塑料上时被冷冻存储。因此，细胞必须从悬浮液中解冻，培养几天或几周，最后转移到多孔板上，以获得所需的应用。这个低效的过程耗费了大量的时间来处理细胞，而不是进行生物医学研究或其他增值活动。在这里，我们证明了合成的大分子冷冻保护剂能够在行业标准的组织培养多孔板中对具有生物医学意义的重要细胞单层进行常规、可重复性和坚固的冷冻保存。这些细胞只需用培养液解冻，并放入培养箱中即可在24小时内使用。解冻后的细胞恢复率在三种细胞系中为80%，井与井之间的差异很小。冷冻保存的细胞保持了良好的形态、膜完整性、增殖能力和代谢活性，凋亡细胞略有增加，对使用阿霉素的毒理学挑战反应良好。这些发现证实，这些细胞在解冻24小时后即可进行“化验”。总体而言，我们表明，大分子冷冻保护剂可以解决长期存在的低温生物学挑战，并提供了将常规细胞培养转变为生物医学发现的潜力。
Cell monolayers underpin the discovery and screening of new drugs and allow for fundamental studies of cell biology and disease. However, current cryopreservation technologies do not allow cells to be stored frozen while attached to tissue culture plastic. Hence, cells must be thawed from suspension, cultured for several days or weeks, and finally transferred into multiwell plates for the desired application. This inefficient process consumes significant time handling cells, rather than conducting biomedical research or other value-adding activities. Here, we demonstrate that a synthetic macromolecular cryoprotectant enables the routine, reproducible, and robust cryopreservation of biomedically important cell monolayers, within industry-standard tissue culture multiwell plates. The cells are simply thawed with media and placed in an incubator ready to use within 24 h. Post-thaw cell recovery values were >80% across three cell lines with low well-to-well variance. The cryopreserved cells retained healthy morphology, membrane integrity, proliferative capacity, and metabolic activity; showed marginal increases in apoptotic cells; and responded well to a toxicological challenge using doxorubicin. These discoveries confirm that the cells are “assay-ready” 24 h after thaw. Overall, we show that macromolecular cryoprotectants can address a long-standing cryobiological challenge and offers the potential to transform routine cell culture for biomedical discovery.
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DOI：
10.1002/anie.201706703
发表时间：
2017-12-11
期刊：
Angewandte Chemie (International ed. in English)
影响因子：
--
作者：
Graham B;Bailey TL;Healey JRJ;Marcellini M;Deville S;Gibson MI
通讯作者：
Gibson MI
DOI：
10.1177/1535370214531872
发表时间：
2014-09
期刊：
Experimental biology and medicine (Maywood, N.J.)
影响因子：
--
作者：
Bale SS;Vernetti L;Senutovitch N;Jindal R;Hegde M;Gough A;McCarty WJ;Bakan A;Bhushan A;Shun TY;Golberg I;DeBiasio R;Usta BO;Taylor DL;Yarmush ML
通讯作者：
Yarmush ML
影响因子：
16.6
作者：
Biggs CI;Bailey TL;Ben Graham;Stubbs C;Fayter A;Gibson MI
通讯作者：
Gibson MI
影响因子：
2.7
作者：
Daily, Martin I.;Whale, Thomas F.;Murray, Benjamin J.
通讯作者：
Murray, Benjamin J.
影响因子：
2.7
作者：
Acker, JP;Larese, A;McGann, LE
通讯作者：
McGann, LE