Ligation-Enabled Fluorescence-Coding PCR for High-Dimensional Fluorescence-Based Nucleic Acid Detection.
Ligation-Enabled Fluorescence-Coding PCR for High-Dimensional Fluorescence-Based Nucleic Acid Detection.
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DOI：
10.1021/acs.analchem.0c04221
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发表时间：
2021-02-02
影响因子：
7.4
通讯作者：
Wang TH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Park JS;Pisanic T;Zhang Y;Wang TH
聚合酶链式反应(PCR)是迄今为止最常用的核酸扩增方法，同样被用于过多的诊断目的。然而，到目前为止，基于多重聚合酶链式反应的检测方案在很大程度上受到了与非特异性相互作用相关的技术挑战和传统的基于荧光的分析固有的其他限制。在这里，我们描述了一种新的基于多重聚合酶链式反应的分析策略，称为连接启用的荧光编码聚合酶链式反应(Linc PCR)，它指数级地增强了标准基于荧光的聚合酶链式反应分析的多重能力。这项技术依赖于一个简单的初步连接反应，在这个反应中，目标DNA序列被转化为具有明显终点荧光特征的聚合酶链式反应模板分子。通用TaqMan探针用于创建特定于目标的多色荧光信号，这些信号可以很容易地解码，以识别感兴趣的放大目标。我们通过实施基于两种颜色的检测10个卵巢癌表观遗传生物标记物的方法展示了Linc PCR技术，分析灵敏度低至60个模板分子，没有可检测到的目标串扰。总体而言，Linc PCR提供了一种简单且廉价的方法来实现高维多路复用，可以在多种分子诊断应用中实现。
Polymerase chain reaction (PCR) is by far the most commonly-used method of nucleic acid amplification and has likewise been employed for a plethora of diagnostic purposes. Nonetheless, multiplexed PCR-based detection schemes have hitherto been largely limited by technical challenges associated with nonspecific interactions and other limitations, inherent to traditional fluorescence-based assays. Here we describe a novel strategy for multiplexed PCR-based analysis called Ligation-eNabled fluorescence-Coding PCR (LiNC PCR) that exponentially enhances the multiplexing capability of standard fluorescence-based PCR assays. The technique relies upon a simple, preliminary ligation reaction in which target DNA sequences are converted to PCR template molecules with distinct end-point fluorescence signatures. Universal TaqMan probes are used to create target-specific multi-color fluorescence signals that can be readily decoded to identify amplified targets of interest. We demonstrate the LiNC PCR technique by implementing a 2-color-based assay for detection of 10 ovarian cancer epigenetic biomarkers at analytical sensitivities as low as 60 template molecules with no detectable target crosstalk. Overall, LiNC PCR provides a simple and inexpensive method for achieving high-dimensional multiplexing that can be implemented in manifold molecular diagnostic applications.
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影响因子：
2.9
作者：
Owczarzy, Richard;You, Yong;Groth, Christopher L.;Tataurov, Andrey V.
通讯作者：
Tataurov, Andrey V.
DOI：
10.1073/pnas.88.16.7276
发表时间：
1991-08-01
影响因子：
11.1
作者：
HOLLAND, PM;ABRAMSON, RD;GELFAND, DH
通讯作者：
GELFAND, DH
连接酶链式反应与滚环扩增相结合，用于高灵敏度检测单核苷酸多态性
影响因子：
4.2
作者：
Cheng, Yongqiang;Zhao, Jingjing;Li, Zhengping
通讯作者：
Li, Zhengping
DOI：
10.1016/j.meegid.2005.08.004
发表时间：
2006-01
期刊：
Infection, genetics and evolution : journal of molecular epidemiology and evolutionary genetics in infectious diseases
影响因子：
--
作者：
Monis PT;Giglio S
通讯作者：
Giglio S
影响因子：
56.9
作者：
NILSSON, M;MALMGREN, H;LANDEGREN, U
通讯作者：
LANDEGREN, U