Establishment of a well-characterized SARS-CoV-2 lentiviral pseudovirus neutralization assay using 293T cells with stable expression of ACE2 and TMPRSS2.
Establishment of a well-characterized SARS-CoV-2 lentiviral pseudovirus neutralization assay using 293T cells with stable expression of ACE2 and TMPRSS2.
复制标题
使用稳定表达ACE 2和TMPRSS 2的293 T细胞建立表征良好的SARS-CoV-2慢病毒假病毒中和试验。
DOI：
10.1371/journal.pone.0248348
复制
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Weiss CD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Neerukonda SN;Vassell R;Herrup R;Liu S;Wang T;Takeda K;Yang Y;Lin TL;Wang W;Weiss CD
假病毒是高致病性病毒的有用替代物，因为它们的安全性、遗传稳定性和筛选测定的可扩展性。存在许多不同的伪病毒平台，每个平台都有不同的优点和局限性。在这里，我们报告了我们的努力，以优化和表征艾滋病毒为基础的慢病毒假病毒检测筛选中和抗体的SARS-CoV-2使用稳定的293 T细胞系表达人血管紧张素转换酶2（ACE 2）和跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS 2）。我们评估了不同的靶细胞，建立了至少在两个对数范围内产生读数的条件，并确认了在一系列假病毒输入中一致的中和滴度。使用参考血清和血浆样本组，我们评价了检测方法的精密度，结果表明我们的中和滴度与其他检测方法中报告的结果具有良好的相关性。总体而言，我们的慢病毒检测相对简单，可扩展，适用于各种SARS-CoV-2进入和中和筛选检测。
Pseudoviruses are useful surrogates for highly pathogenic viruses because of their safety, genetic stability, and scalability for screening assays. Many different pseudovirus platforms exist, each with different advantages and limitations. Here we report our efforts to optimize and characterize an HIV-based lentiviral pseudovirus assay for screening neutralizing antibodies for SARS-CoV-2 using a stable 293T cell line expressing human angiotensin converting enzyme 2 (ACE2) and transmembrane serine protease 2 (TMPRSS2). We assessed different target cells, established conditions that generate readouts over at least a two-log range, and confirmed consistent neutralization titers over a range of pseudovirus input. Using reference sera and plasma panels, we evaluated assay precision and showed that our neutralization titers correlate well with results reported in other assays. Overall, our lentiviral assay is relatively simple, scalable, and suitable for a variety of SARS-CoV-2 entry and neutralization screening assays.
登录
查看更多内容
DOI：
10.3390/v12091011
发表时间：
2020-09-10
期刊：
Viruses
影响因子：
--
作者：
Hyseni I;Molesti E;Benincasa L;Piu P;Casa E;Temperton NJ;Manenti A;Montomoli E
通讯作者：
Montomoli E
影响因子：
28.3
作者：
Gorbalenya, Alexander E.;Baker, Susan C.;Ziebuhr, John
通讯作者：
Ziebuhr, John
影响因子：
5.4
作者：
Johnson MC;Lyddon TD;Suarez R;Salcedo B;LePique M;Graham M;Ricana C;Robinson C;Ritter DG
通讯作者：
Ritter DG
影响因子：
64.8
作者：
Hoffmann, Markus;Moesbauer, Kirstin;Poehlmann, Stefan
通讯作者：
Poehlmann, Stefan
影响因子：
82.9
作者：
Amanat F;Stadlbauer D;Strohmeier S;Nguyen THO;Chromikova V;McMahon M;Jiang K;Arunkumar GA;Jurczyszak D;Polanco J;Bermudez-Gonzalez M;Kleiner G;Aydillo T;Miorin L;Fierer DS;Lugo LA;Kojic EM;Stoever J;Liu STH;Cunningham-Rundles C;Felgner PL;Moran T;García-Sastre A;Caplivski D;Cheng AC;Kedzierska K;Vapalahti O;Hepojoki JM;Simon V;Krammer F
通讯作者：
Krammer F