Generation of a Recombinant Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Stably Expressing Two Marker Genes.
Generation of a Recombinant Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Stably Expressing Two Marker Genes.
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稳定表达两个标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的产生。
DOI：
10.3389/fvets.2020.548282
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发表时间：
2020
影响因子：
3.2
通讯作者：
Wei Z
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wang H;Xie X;He W;Wang Y;Ren T;Ouyang K;Chen Y;Huang W;Wei Z
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已被用作疫苗的基因表达载体。这些重组的PRRSV载体大多只通过nsp2高变区的内部插入或表达盒表达单个外源基因，其中一些重组载体在遗传上是不稳定的。在此，我们将NSP2内插入法和表达盒方法相结合，构建了稳定表达红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的新型重组PRRSV。携带两个标记基因rGX-RFP-GFP的重组PRRSV的生物学特性分析表明，它的生长动力学与亲本病毒rGXAM相似，但其感染性病毒的产量较低。共聚焦荧光显微镜观察到rGX-RFP-GFP病毒感染MARC-145细胞后RFP和GFP的共表达。此外，基于PRRSV的双标记基因表达载体在MARC-145细胞中连续传代20代后具有遗传稳定性。这些数据表明，从一个PRRSV载体中表达两个感兴趣的免疫原是可能的。
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) has been used as a gene expression vector in the development of vaccines. Most of these recombinant PRRSV vectors express only a single foreign gene through either an internal insertion in the hypervariable region of nsp2 or expression cassette and some of these recombinant vectors are genetically unstable. Here, we combined internal insertion in nsp2 and expression cassette methods to generate a novel recombinant PRRSV stably expressing the red fluorescence protein (RFP) and the green fluorescence protein (GFP) genes. Biological characteristic analysis of the recombinant PRRSV carrying the two marker genes, rGX-RFP-GFP, showed that it displayed similar growth kinetics and yet it yielded less infectious viruses when compared to the parental virus rGXAM. Co-expression of both the RFP and GFP was observed using confocal fluorescence microscopy when the rGX-RFP-GFP viruses infected MARC-145 cells. Furthermore, the PRRSV-based two-marker gene expression vector is genetically stable during 20 serial passages in MARC-145 cells. These data demonstrate that it is possible to express two interested immunogens from a single PRRSV vector.
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