Determination of In Vivo Interactomes of Dot/Icm Type IV Secretion System Effectors by Tandem Affinity Purification.
Determination of In Vivo Interactomes of Dot/Icm Type IV Secretion System Effectors by Tandem Affinity Purification.
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通过串联亲和纯化测定 Dot/Icm IV 型分泌系统效应子的体内相互作用。
DOI：
10.1007/978-1-4939-9048-1_19
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
So EC
中科院分区：
文献类型：
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作者：
So EC
Dot/ICM IV型分泌系统(T4SS)在军团菌种的发病中起着至关重要的作用，它将大量的效应蛋白转运到宿主细胞中。识别这些效应器的宿主细胞靶标对于揭示它们在控制宿主中的作用通常是至关重要的。在这里，我们描述了一种方法来表征感染宿主细胞中与效应器相关的蛋白质复合体。为了实现这一点，表达感兴趣的效应器的军团菌被用来感染表达Bira的宿主细胞，从而导致易位的效应器的生物素化。化学交联后，利用金属亲和树脂和中性亲和素树脂进行串联亲和纯化，分离出效应性相互作用，并通过Western blotting或MS进行鉴定。
The Dot/Icm type IV secretion system (T4SS) is essential for the pathogenesis ofLegionellaspecies and translocates a multitude of effector proteins into host cells. The identification of host cell targets of these effectors is often critical to unravel their roles in controlling the host. Here we describe a method to characterize the protein complexes associated with effectors in infected host cells. To achieve this,Legionellaexpressing an effector of interest fused to a Bio-tag, a combination of hexahistidine tags and a specific recognition sequence for the biotin ligase BirA, are used to infect host cells expressing BirA, which leads to biotinylation of the translocated effector. Following chemical cross-linking, effector interactomes are isolated by tandem affinity purification employing metal affinity and NeutrAvidin resins and identified by western blotting or mass spectrometry.
创建定制的细胞内生态位：军团菌 IV 型分泌系统效应器颠覆宿主细胞信号传导。
影响因子：
2.8
作者：
So EC
通讯作者：
So EC
影响因子：
56.9
作者：
Chien, MC;Morozova, I;Russo, JJ
通讯作者：
Russo, JJ
细胞内细菌病原体嗜肺军团菌元效应器活性的多种机制。
影响因子：
9.9
作者：
Urbanus,MaleneL;Quaile,AndrewT;Stogios,PeterJ;Morar,Mariya;Rao,Chitong;DiLeo,Rosa;Evdokimova,Elena;Lam,Mandy;Oatway,Christina;Cuff,MarianneE;Osipiuk,Jerzy;Michalska,Karolina;Nocek,BoguslawP;Taipale,Mikko;Savchenko,Alexei
通讯作者：
Savchenko,Alexei