Preparation of microcrystals in lipidic cubic phase for serial femtosecond crystallography.
Preparation of microcrystals in lipidic cubic phase for serial femtosecond crystallography.
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DOI：
10.1038/nprot.2014.141
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发表时间：
2014-09
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
Cherezov, Vadim
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu, Wei;Ishchenko, Andrii;Cherezov, Vadim
我们最近建立了一个程序，连续飞秒晶体学在立方相（LCP-SFX）的蛋白质结构测定在X射线自由电子激光（XFELs）。LCP-SFX使用凝胶状无规立方相（LCP）作为用于生长和递送膜蛋白微晶的基质，用于晶体学数据收集。LCP是一种液晶中间相，由脂质和水组成。它提供了一个膜模拟环境，稳定膜蛋白，并支持其结晶。在这里，我们描述了用于LCP-SFX应用的微晶体的制备和表征的详细程序。LCP-SFX相对于传统晶体学方法的优势包括收集室温高分辨率数据的能力，其辐射损伤的影响最小，来自难以结晶的亚10 μm膜和可溶性蛋白质晶体，同时消除了晶体收获和低温冷却的需要。与使用液体注射器的溶液中的微晶的SFX方法相比，LCP-SFX在目前可用的XFEL上将数据收集的蛋白质消耗减少了2-3个数量级。整个过程通常需要3-5天，包括晶体生长所需的时间。
We have recently established a procedure for serial femtosecond crystallography in lipidic cubic phase (LCP-SFX) for protein structure determination at X-ray free electron lasers (XFELs). LCP-SFX uses the gel-like lipidic cubic phase (LCP) as a matrix for growth and delivery of membrane protein microcrystals for crystallographic data collection. LCP is a liquid-crystalline mesophase, composed of lipids and water. It provides a membrane-mimicking environment that stabilizes membrane proteins and supports their crystallization. Here we describe detailed procedures for the preparation and characterization of microcrystals for LCP-SFX applications. The advantages of LCP-SFX over traditional crystallographic methods include the capability of collecting room temperature high-resolution data with minimal effects of radiation damage from sub-10 µm crystals of membrane and soluble proteins that are difficult to crystallize, while eliminating the need for crystal harvesting and cryo-cooling. Compared to SFX methods for microcrystals in solution using liquid injectors, LCP-SFX reduces protein consumption by 2–3 orders of magnitude for data collection at currently available XFELs. The whole procedure typically takes 3–5 days, including the time required for crystals to grow.
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DOI：
10.1126/science.1244142
发表时间：
2013-12-20
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Liu W;Wacker D;Gati C;Han GW;James D;Wang D;Nelson G;Weierstall U;Katritch V;Barty A;Zatsepin NA;Li D;Messerschmidt M;Boutet S;Williams GJ;Koglin JE;Seibert MM;Wang C;Shah ST;Basu S;Fromme R;Kupitz C;Rendek KN;Grotjohann I;Fromme P;Kirian RA;Beyerlein KR;White TA;Chapman HN;Caffrey M;Spence JC;Stevens RC;Cherezov V
通讯作者：
Cherezov V
DOI：
10.1126/science.1217737
发表时间：
2012-07-20
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Boutet S;Lomb L;Williams GJ;Barends TR;Aquila A;Doak RB;Weierstall U;DePonte DP;Steinbrener J;Shoeman RL;Messerschmidt M;Barty A;White TA;Kassemeyer S;Kirian RA;Seibert MM;Montanez PA;Kenney C;Herbst R;Hart P;Pines J;Haller G;Gruner SM;Philipp HT;Tate MW;Hromalik M;Koerner LJ;van Bakel N;Morse J;Ghonsalves W;Arnlund D;Bogan MJ;Caleman C;Fromme R;Hampton CY;Hunter MS;Johansson LC;Katona G;Kupitz C;Liang M;Martin AV;Nass K;Redecke L;Stellato F;Timneanu N;Wang D;Zatsepin NA;Schafer D;Defever J;Neutze R;Fromme P;Spence JC;Chapman HN;Schlichting I
通讯作者：
Schlichting I
影响因子：
--
作者：
LARSSON, K
通讯作者：
LARSSON, K
影响因子：
3.4
作者：
Cherezov, V;Fersi, H;Caffrey, M
通讯作者：
Caffrey, M
影响因子：
3.3
作者：
Kulkarni, Chandrashekhar V.;Wachter, Wolfgang;Ahualli, Silvia
通讯作者：
Ahualli, Silvia