VikAD, a Vika site-specific recombinase-based system for efficient and scalable helper-dependent adenovirus production.
VikAD, a Vika site-specific recombinase-based system for efficient and scalable helper-dependent adenovirus production.
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DOI：
10.1016/j.omtm.2021.12.001
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发表时间：
2022-03-10
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Young SM Jr
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Phillips S;Ramos PV;Veeraraghavan P;Young SM Jr
重组病毒载体已成为基本体内研究应用的不可或缺的工具。辅助依赖性腺病毒（HdAd）载体具有约36kb DNA的大包装容量，其在体外和体内介导长期转基因表达。HdAd的大携带能力使得基础研究或需要递送大基因或多个转基因的临床应用成为可能，这些基因或多个转基因不能被包装到其他广泛使用的病毒载体中。目前，常见的HdAd生产系统使用具有侧接loxP或FRT位点的包装信号（HRT）的Ad辅助病毒（HV），其在表达Cre或Flp重组酶的生产细胞中被切除以防止HV包装。然而，这些生产系统阻止了HdAd载体用于依赖于Cre或Flp重组进行细胞类型特异性表达的遗传策略。为了克服这些局限性，我们开发了VikAD生产系统，该系统基于表达Vika重组酶和HV的生产细胞，HV含有侧翼为vox位点的pV10。该生产系统的可用性将极大地扩展HdAd载体用于研究应用的实用性和灵活性，以增加特异性来监测和操纵细胞活性。VikAD是辅助依赖性腺病毒（HdAd）生产平台，其利用表达Vika位点特异性重组酶的细胞系和含有侧翼为vox位点的包装序列的Ad HV。VikAD使得HdAd能够与使用Cre和Flp或其他位点特异性重组酶的遗传交叉策略一起使用。
Recombinant viral vectors have become integral tools for basic in vivo research applications. Helper-dependent adenoviral (HdAd) vectors have a large packaging capacity of ∼36 kb of DNA that mediate long-term transgene expression in vitro and in vivo. The large carrying capacity of HdAd enables basic research or clinical applications requiring the delivery of large genes or multiple transgenes, which cannot be packaged into other widely used viral vectors. Currently, common HdAd production systems use an Ad helper virus (HV) with a packaging signal (Ψ) that is flanked by either loxP or FRT sites, which is excised in producer cells expressing Cre or Flp recombinases to prevent HV packaging. However, these production systems prevent the use of HdAd vectors for genetic strategies that rely on Cre or Flp recombination for cell-type-specific expression. To overcome these limitations, we developed the VikAD production system, which is based on producer cells expressing the Vika recombinase and an HV that contains a Ψ flanked by vox sites. The availability of this production system will greatly expand the utility and flexibility of HdAd vectors for use in research applications to monitor and manipulate cellular activity with increased specificity. VikAD is a helper-dependent adenovirus (HdAd) production platform that utilizes a cell line expressing the Vika site-specific recombinase and an Ad HV that contains the packaging sequence flanked by vox sites. VikAD enables use of HdAd with genetic intersectional strategies using Cre and Flp or other site-specific recombinases.
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