A platform for rapid generation of single and multiplexed reporters in human iPSC lines.
A platform for rapid generation of single and multiplexed reporters in human iPSC lines.
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DOI：
10.1038/srep09205
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发表时间：
2015-03-17
影响因子：
4.6
通讯作者：
Zeng X
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pei Y;Sierra G;Sivapatham R;Swistowski A;Rao MS;Zeng X
诱导多能干细胞（iPSC）是药物发现试验和毒理学筛选的重要工具。在这份手稿中，我们设计了高效的TALEN和ZFN，以靶向广泛可用且充分表征的无整合iPSC系中染色体13和19上的两个安全港位点。我们表明，这些位点可以在多个iPSC系中靶向产生报告系统，同时保留多能性特征。我们将这一概念扩展到使用C-末端靶向策略使谱系报告基因以谱系特异性方式表达的内源性基因。此外，我们证明，我们可以开发一个主细胞系策略，然后使用Cre重组酶诱导的盒交换策略，以快速交换报告盒，以开发新的报告细胞系在相同的同基因背景，在高效率。同样重要的是，我们表明这种重组策略允许靶向祖细胞阶段，进一步增加了平台系统的实用性。结果一致提供了一个新的平台，用于快速开发定制的单或双报告系统的筛选测定。
Induced pluripotent stem cells (iPSC) are important tools for drug discovery assays and toxicology screens. In this manuscript, we design high efficiency TALEN and ZFN to target two safe harbor sites on chromosome 13 and 19 in a widely available and well-characterized integration-free iPSC line. We show that these sites can be targeted in multiple iPSC lines to generate reporter systems while retaining pluripotent characteristics. We extend this concept to making lineage reporters using a C-terminal targeting strategy to endogenous genes that express in a lineage-specific fashion. Furthermore, we demonstrate that we can develop a master cell line strategy and then use a Cre-recombinase induced cassette exchange strategy to rapidly exchange reporter cassettes to develop new reporter lines in the same isogenic background at high efficiency. Equally important we show that this recombination strategy allows targeting at progenitor cell stages, further increasing the utility of the platform system. The results in concert provide a novel platform for rapidly developing custom single or dual reporter systems for screening assays.
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