CRISPR/Cas9 engineering of a KIM-1 reporter human proximal tubule cell line.
CRISPR/Cas9 engineering of a KIM-1 reporter human proximal tubule cell line.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0204487
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Wilson MH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Veach RA;Wilson MH
我们使用CRISPR/Cas9系统在肾损伤分子-1（KIM-1）基因座敲入报告转基因，并分离人近端小管细胞（HK-2）克隆。PCR验证了荧光素酶和eGFP报告基因在KIM-1基因座处的靶向敲入。HK-2-KIM-1报告细胞对包括缺氧、顺铂和高糖的各种刺激有反应，表明KIM-1表达上调。我们尝试使用CRISPR/Cas9在端粒酶永生化的人RPTEC细胞中改造KIM-1报告基因。然而，这些细胞表现出不能在靶基因座进行同源重组。KIM-1报告人近端肾小管细胞可能是药物发现抑制肾损伤的分子的有价值的工具。此外，我们的基因靶向策略可用于其他细胞系，以评估KIM-1在体外或体内的生物学。
We used the CRISPR/Cas9 system to knock-in reporter transgenes at the kidney injury molecule-1 (KIM-1) locus and isolated human proximal tubule cell (HK-2) clones. PCR verified targeted knock-in of the luciferase and eGFP reporter at the KIM-1 locus. HK-2-KIM-1 reporter cells responded to various stimuli including hypoxia, cisplatin, and high glucose, indicative of upregulation of KIM-1 expression. We attempted using CRISPR/Cas9 to also engineer the KIM-1 reporter in telomerase-immortalized human RPTEC cells. However, these cells demonstrated an inability to undergo homologous recombination at the target locus. KIM-1-reporter human proximal tubular cells could be valuable tools in drug discovery for molecules inhibiting kidney injury. Additionally, our gene targeting strategy could be used in other cell lines to evaluate the biology of KIM-1 in vitro or in vivo.
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