Determination of the phase diagram for soluble and membrane proteins.
Determination of the phase diagram for soluble and membrane proteins.
复制标题
DOI：
10.1021/jp911780z
复制
发表时间：
2010-04-08
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kenis PJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Talreja S;Perry SL;Guha S;Bhamidi V;Zukoski CF;Kenis PJ
有效地确定新蛋白质相行为的方法有可能显著地有利于结构生物学的研究。在这里，我们提出了使用基于蒸发的结晶平台来确定蛋白质/沉淀体系的溶解度边界和超溶解度边界的方案。该策略利用在该平台中发生的定义良好的蒸发速率来确定液滴在任何时间点的状态，而不依赖于基于平衡的终点。该方法的动态特性有效地沿着已知路径遍历相空间，这样就可以绘制可溶性蛋白和膜蛋白的溶解度图，同时使用比优化筛选中通常使用的蛋白质更少的蛋白质。此外，这种方法的变化可以用来解耦晶体成核和生长事件，因此可以在给定的液滴内获得更少和更大的晶体。后一种方案可用于挽救结晶试验，其中观察到微小晶体的阵雨。我们使用溶菌酶和核糖核酸酶A以及膜蛋白细菌视紫红质对两种方案进行了验证，以确定相行为和优化晶体质量。
Methods to efficiently determine the phase behavior of novel proteins have the potential to significantly benefit structural biology efforts. Here, we present protocols to determine both the solubility boundary and the supersolubility boundary for protein/precipitant systems using an evaporation-based crystallization platform. This strategy takes advantage of the well-defined rates of evaporation that occur in this platform to determine the state of the droplet at any point in time without relying on an equilibrium-based end point. The dynamic nature of this method efficiently traverses phase space along a known path, such that a solubility diagram can be mapped out for both soluble and membrane proteins while using a smaller amount of protein than what is typically used in optimization screens. Furthermore, a variation on this method can be used to decouple crystal nucleation and growth events, so fewer and larger crystals can be obtained within a given droplet. The latter protocol can be used to rescue a crystallization trial where showers of tiny crystals were observed. We validated both of the protocols to determine the phase behavior and the protocol to optimize crystal quality using the soluble proteins lysozyme and ribonuclease A as well as the membrane protein bacteriorhodopsin.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1016/s1046-2023(05)80143-4
发表时间：
1990-01-01
期刊：
Methods (Orlando)
影响因子：
--
作者：
DUCRUIX A F;RIES-KAUTT M M
通讯作者：
RIES-KAUTT M M
影响因子：
48
作者：
Chayen, Naomi E.;Saridakis, Emmanuel
通讯作者：
Saridakis, Emmanuel
影响因子：
3.5
作者：
Gaucher, JF;RiesKautt, M;Ducruix, A
通讯作者：
Ducruix, A
影响因子：
15
作者：
Annunziata, Onofrio;Payne, Andrew;Wang, Ying
通讯作者：
Wang, Ying
影响因子：
1.8
作者：
ATAKA, M;SHINZAWAITOH, K;YOSHIKAWA, S
通讯作者：
YOSHIKAWA, S